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1、深低温冷冻对rhBMP作者：闫小龙 李小飞 刘勇 卢强 王律【关键词】气管 EffectofcryopreservationonrhBMP2inducedregenerationofdogstrachealcartilage 【Abstract】 AIM:ToconfirmthevalidityandpotentialapplicationofimplantingtherebinanthumanbonemorphogeicprotEin2(rhBMP2)ongreldogslyandequallydividedinto4groups.Fi
2、veringcervicaltrachealsegmententum.GroupAonthsbeforetheoperation,alsortemspecimensinedgrosslyandhistologically.Areaofneoreneationinthecryopreservedrachealallografts.CryopreservedtrachealallograftshavebetterneorphogeicprotEIns 【摘要】目的：研究应用重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP2)/胶原缓释系统诱导犬冷冻气管移植软
3、骨再生的作用.方法：将32只杂种犬随机等分为4组,行5个颈部气管环原位异体移植，带血管蒂大网膜包绕.A组为未冷冻组，气管环间植入rhBMP2/胶原组标记为A1组，空白对照标记为A2组；B组术前将移植体气管经深低温液氮保存2mo，处理同A组，分别标记为B1、B2两组.所有实验犬于术后8o后气管软骨细胞数会降为原来的65%~75%之间［3,4］，且移植后由于缺血及轻微的慢性排斥反应，气管移植体的软骨会被进一步损伤［5］.我们根据以往气管移植系统研究的思路［6,7］,应用重组人骨形态发生蛋白－2(rebinanthumanbonemorphogei
4、cprotein-2,rhBMP2)/胶原缓释系统植入深低温冷冻的犬气管移植体诱导软骨再生.试图抵抗冷冻对气管移植体的损伤,从而最大程度保持冷冻移植体的生理结构和功能. 1材料和方法 11材料选择西安地区健康成年杂种犬32只,均为雄性,体质量15～20kg.①rhBMP2由第四军医大学西京医院全军骨科研究所提供，小鼠肌袋生物学活性试验证实rhBMP2诱导成骨活性良好;②胶原的制备:根据 2结果 21生存状况和存活率A1、B2组中各有1只实验犬术后未存活至2mo，30只实验犬存活达到预杀期.均未发生切口感染等并发症.A1组中有2只犬，A
5、2组中有3只在达到预杀期前略有呼吸困难，其余各组犬无明显呼吸困难. 22大体改变B组动物标本表现较A组好.4组移植体外覆的大网膜血管丰富，网膜组织与移植体气管粘连紧密.A组各犬移植体管壁增厚,管腔明显狭窄均超过50%，B组移植体管腔通畅气管狭窄均未超过50%(Fig1A)；轻微的狭窄均因吻合口瘢痕增生所致，各软骨环间肉眼下均未见到新生软骨组织. 23病理学检查结果A组标本管腔内只有在距吻合口05cm处见少量上皮分化为稀疏的柱状纤毛上皮，黏膜下层增厚明显，可见大量的肉芽组织增生，见大量软骨错位明显，软骨间见大量浸润的淋巴细胞和单核细胞，B组
6、标本管腔内布满密集的柱状纤毛上皮，两组黏膜下层及软骨层见少量淋巴细胞、单核细胞浸润，软骨层厚度轻度变薄，未见明显变形.A1，B1组标本环间见大量间充质细胞聚集，并可见软骨及软骨岛形成(Fig1B，1C，1D)，而A2，B2组标本环间少见间充质细胞聚集，无软骨及软骨岛形成，4组均有软骨膜下成骨，但未见质与量上明显差别. 图1植入BMP气管移植体术后大体及镜下情况 略 24定量组织学结果将各组织切片在统一的倍数下观察,计算各环间成软骨的像素面积.用KruskaloriyamaH［10］等通过动物实验表明移植体在冷冻30d后移植体软骨细胞数略有
7、减少，冷冻60d后移植体软骨细胞数只减少20%.KushibeK等［4］通过Na235SO4融合实验对大鼠气管移植体进行研究得出结论：热缺血对气管移植体软骨的影响大，6h的热缺血时间使软骨细胞活性数降为新鲜气管软骨细胞数的一半，而12h后软骨活性细胞数仅为原来的1/3.在液氮中冷冻2mo后气管软骨细胞数会降为原来的65%~75%之间，后又证实冷冻1,2,3,6,9,12mo后气管软骨细胞的活性均为原来的65%~75%之间.所以，对于更加有效促进上皮及软骨的再生的研究将是气管移植领域的重点，本课题设计利用BMP的成骨特性,借助以往气管软骨再生的
8、研究思路［6,7］，设计观查观察冷冻异体气管移植软骨的再生，针对冷冻损伤软骨这一事实，克服移植体气管的塌陷，异体气管移植体萎缩等现象. 我们在实验中观察到了异体移
