氨甲酰妥布霉素高产菌株选育及其发酵特性研究论文

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1、氨甲酰妥布霉素高产菌株选育及其发酵特性研究论文林玉双洪文荣林烨梁枝定【摘要】目的筛选氨甲酰妥布霉素高产菌株并稳定其发酵效价。方法以黑暗链霉菌Ts228为出发菌株，经自然分离，UV诱变结合耐自身代谢产物处理，采用琼脂块法并结合摇瓶发酵来筛选高产菌，获得了Tt49新菌株。以摇瓶发酵考察生长特性，罐上发酵绘制代谢曲线。结果效价提高了1.8倍，妥布霉素含量高达68.5%。该菌株生长周期仅4d，传代稳定。种龄18h左右.freell。结论自然分离与诱变相结合，是黑暗链霉菌选育的有效途径。出发菌株经UV诱变和

2、耐受驯育，发酵效价显著提高。溶氧是妥布霉素发酵生产中的重要调控因子。【关键词】黑暗链霉菌；氨甲酰妥布霉素；深层发酵；抗生素ABSTRACTObjectiveScreeningahighandstablemutantstrainfromS.tenebrariusTs228forCTB(carbamoyltobramycin)production.MethodsAparentstrain(Ts228)ycin.Finally,ahighyieldmutantTt49entationenter.Res

3、ultsAmutantstrainTt49entationtitreincreasedto5869u/mleshigherthantheparentstrainTs228,andtheponentratiooftobramycinesupto68.5%.ThefermentationcourseofTt49onlyneed4days.The18hseedmyceliumand10%CC(B)63501］，本实验室保藏菌。培养基(%)①斜面：葡萄糖3.0，蛋白胨0.5，氯化钾0.05，FeSO4

4、·7H2O0.001，磷酸氢二钾0.10，硫酸镁0.05，琼脂2.0，pH自然；②种子：葡萄糖0.5，玉米淀粉1.0，黄豆饼粉1.5，硫酸镁0.5，磷酸二氢钾0.05，氯化钾0.1，CaCl20.025，pH自然；③发酵：葡萄糖1.5，玉米粉2.0，黄豆饼粉3.5，硫酸铵0.7，硫酸镁1.1，碳酸钙0.7，硫酸锌0.01，玉米淀粉2.0，豆油1.0，pH7.0～7.2。仪器生化培养箱(LRH250A)；220r/min摇瓶机(自制)；15L种子罐和50L发酵罐(上海国强生化工程装备有限公司)；台式离

5、心机(TGL16G)。妥布霉素标准品和生测培养基：中国生物制品检定所。1.2分析方法发酵效价采用生物检定法［6］；组分检测用薄板层析［6］和HPLC法［7］。菌丝浓度测定，取发酵液10ml，3000r/min离心10min，去上清液后的固体物作为相对菌丝浓度。其它项目(总糖、还原糖、氨基氮等)均采用工业化常规分析法［8］。2结果与讨论2.1自然分离出发菌株黑暗链霉菌Ts228主产尼拉霉素2，4和5′三个组分，菌落较大，孢子乳白，生测效价为3260u/ml。该菌株的单孢子悬液经自然分离获得白色和淡黄色

6、两类菌落，琼脂块法检测菌落的抑菌效果。结果显示白色菌落抑菌活性高于淡黄色菌落，具备较好的生产潜力；淡黄色菌落在多次测定中抑菌活性均较低，参照文献［9］认为该菌落形态为退化株，不宜做出发菌。对白色菌落进行多次分离纯化，获得一比出发菌株提高8.27%，编号为Tn17的高产菌株。2.2紫外诱变处理取Tn17菌株，制作单孢子悬液，分别在30etabolicycestenebrarius,aStreptomycesSpeciesycinbiosyntheticgeneclusterfromStreptomy

7、cestenebrarius［J］.FEMSMicrobiolLett,2004,230(2):185～190.［6］中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)［S］.北京：化学工业出版社,2005：附录70～74.［7］杨茂俊，吴章秀.高效液相色谱法分析国产妥布霉素及有关物质［J］.中国抗生素杂志，1996，22(增刊)：72～76.［8］陈钧鸣，徐玲娣编.抗生素工业分析［M］.北京：中国医药科技出版社，1991：108～111.［9］洪文荣，石贤爱，程骥，等.多因子处理黑暗链霉菌

8、微型化理性筛选［J］.中国抗生素杂志，2001，26(6)：426～439.［10］许学书，方夏虹，俞俊棠.妥布霉素发酵中的二次生长［J］.中国抗生素杂志，2001，26(1)：32～34.