大黄素、黄芪多糖在体外对乙型肝炎病毒的抑制作用

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1、大黄素、黄芪多糖在体外对乙型肝炎病毒的抑制作用作者：党双锁　张正国　张欣　宋平　边静　程延安【摘要】　　目的体外观察大黄素、黄芪多糖单用与联合应用抗HBV的作用。方法以HepG2.2.15细胞为研究模型，选用干扰素α、拉米夫定为阳性对照药物，观察培养液中加入不同浓度大黄素、黄芪多糖及两药联合应用抗HBV作用的效果。采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBVDNA，ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化。采用MTT法观察它们对细胞生长的影响。结果大黄素的3个剂量组(12.5、25.0、50.0mg/L)和所观察的时间点(3、6、9d)对HBV

2、DNA、HBsAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P<0.05)。大黄素对HBVDNA抑制的半数抑制浓度为21mg/L，对HepG2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为40.66mg/L，治疗指数为1.94。同时发现黄芪多糖各剂量组对HBV无明显的抑制作用(P>0.05)。大黄素、黄芪多糖联合应用在疗效方面无明显的交互作用(P>0.05)。结论大黄素在体外对HBV具有一定的抑制作用，黄芪多糖无明显抑制HBV的作用，两药联用无明显协同抗HBV的作用。【关键词】大黄素；黄芪多糖；乙型肝炎病毒；细胞培养　　Inhibitiononhepatit

3、isBvirusbyemodin　andastragaluspolysaccharidesinvitro　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofemodin,astragaluspolysaccharides(APS)onhepatitisBvirus(HBV)invitro.MethodsHumanhepatomaG2.2.15celllinestablyexpressedhepatitisBvirusparticlesinculture.Thecellsodin,APS,interferonα,andlamiv

4、udin,respectively.RealtimePCRodinresultedinatimeandconcentrationdependentinhibitionofHBVDNAreplicationandHBsAg,HBeAgsecretion(P<0.05).IC50toHBVDNAg/L,CC50toHepG2.2.15cellsg/L,andthetreatmentindex(TI)odinandAPS(P>0.05).ConclusionEmodinhadtimeandconcentrationdependentinhibito

5、ryeffectstoHBVinvitroinsomeextent;APScouldnotinhibitHBVobviouslyinvitro;CoadministrationofemodinandAPShadnotsignificantinteractioninrestrainingHBVinvitro.　　KEYTT，Sigma)，二甲基亚砜(DMSO,Sigma)，HBsAg和HBeAg的ELESA检测试剂盒(上海华泰生物工程公司)，HBVDNA提取及扩增荧光检测试剂盒(广州中山大学达安基因股份有限公司)，和PE7700型自动荧光PCR仪(美国Perkin

6、Elmer公司)。　　1.3细胞HepG2.2.15细胞由第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心惠赠，可稳定表达乙肝病毒蛋白并分泌病毒颗粒。培养液为DMEM(Gibco)，含200mL/L胎牛血清(杭州四季青生物材料公司)、0.3g/L谷氨酰胺(Gibco)，1×105u/L青链霉素(华北制药厂)，碳酸氢钠调整pH值到7.2。消化细胞用2.5g/L胰蛋白酶(Gibco)。　　1.4细胞培养2.5g/L胰蛋白酶消化细胞，以1×104个/孔接种于96孔板，每孔200μL，于37℃、50mL/LCO2培养箱培养24h，待细胞贴壁后，换培养液进行实验。　　1.5实验分组实

7、验共分3大组，17个剂量组，分组如下：阳性对照组分别为干扰素(INFα)、拉米夫定，各设3个剂量组(125000、250000、500000u/LINFα；0.025、0.05、0.1μmol/L3TC)；实验组为3个组，即大黄素组(12.5、25.0、50.0mg/L)，黄芪多糖组(120、240、480g/L)，联合用药组(25.0mg/L大黄素＋120g/L黄芪多糖，50.0mg/L大黄素＋120g/L黄芪多糖，25.0mg/L大黄素＋240g/L黄芪多糖，50.0mg/L大黄素＋240g/L黄芪多糖)；阴性对照组即生理盐水组，用等体积生理盐水加入。实验中除

8、阴性对照组