曲尼斯特对大鼠放射性肺损伤的干预作用

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1、曲尼斯特对大鼠放射性肺损伤的干预作用作者：谢聪颖，张薛榜，吴式琇，李凡凡，官静，郑举奖，陈锡文【摘要】［目的］观察曲尼斯特（Tranilast）对放射性肺损伤大鼠的转化生长因子β1（TGF-β1）及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。［方法］65只ethods］Sixty-fiveorphologicalcharacteristicsinrightpulmonaryicroscopically.［Results］paredtoirradiationalonegroup,theappearanceofalveolitisandfibrosisild,andTGF-β

2、1expressiononthsafterirradiationinexperimentalgroup(P=0.002).TypeⅠcollagen(3monthsafterirradiation)andⅢcollagendeposition(2monthsafterirradiation)inexperimentalgroupsignificantlydecreasedparedonthafterradiationinexperimentalgroup.［Conclusion］Tranilastalleviatesradiation-inducedlun

3、ginjuryviadog/kg，持续到照射后2个月。空白组与单照组均灌以等体积的生理盐水。1．2照射方法经腹腔注射2%氯胺酮（100mg/kg）麻醉后，固定于自制的固定装置上，采用美国Varian公司2300C/D直线加速器产生的6MV-X线，剂量率600cGy/min，照射面积为3.0cm×5.0cm，采用半野技术，行大鼠右全胸照射，照射剂量为单次20Gy。1．3标本制备于照射后0.5、1、2、3、6、9个月分别取大鼠尾静脉血浆标本行TGF-β1检测，实验组与单照组每个时间点脱颈椎法处死4只大鼠，空白组每时间点处死2只大鼠，剪开胸腔取出大鼠右肺组织，右

4、肺中叶固定于4%甲醛液做石蜡切片，行常规光镜形态学观察及免疫组化检测。1．4组织学观察常规HE染色，光镜下观察组织病理学改变。1．5免疫组化检测TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的免疫组化试剂盒均购自武汉博士德公司，一抗为大鼠IgG，二抗为生物素化山羊抗大鼠IgG，按试剂盒说明书操作。采用链霉亲和素—过氧化物酶法（SABC）检测肺内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及TGF-β1的表达，用美国Image-ProPlus专业图像软件分析系统进行数据采集和定量分析，检测其吸光度（A）值。对各组大鼠肺脏切片随机选取10个视野测量，计算阳性染色面积占肺脏视野面积比，并进行定量分析，以染

5、色面积在标本中所占百分比表示。1．6血浆TGF-β1检测取大鼠尾静脉100~150μl血浆标本用于TGF-β1水平的检测，TGF-β1的检测用武汉博士德公司的试剂盒和ELISA方法进行。操作按说明书进行。1．7统计学处理采用SPSS12.0统计软件包计算，多组间数据比较用单因素方差分析，组间两样本均数的比较行LSD检验。2结果2．1光镜下组织病理学改变各观察时间点，空白组大鼠肺组织均未出现明显病变。单照组肺泡炎和纤维化出现早且程度重：照射后1个月即可见间质增厚、肺泡腔内纤维素样渗出；照射后2个月可见局部肺实变和代偿性肺气肿；照射后6个月，肺泡壁重度增厚，肺

6、泡腔明显变小；照射后9个月可见局部肺泡壁被胶原组织代替。曲尼斯特组肺泡炎出现晚且程度轻：照射后2个月见轻度间质增厚，少量纤维素样物渗出，无肺实变；照射后3个月间质仍未见明显胶原纤维；照射后6个月仅见微小灶肺实变；照射后9个月，局部肺泡壁见胶原组织，但纤维化范围较单照组明显减少。2．2免疫组化检测结果2．2．1TGF-β1表达情况TGF-β1表达在支气管上皮细胞，肺泡巨噬细胞，肺泡上皮细胞，血管平滑肌细胞以及成纤维细胞的细胞质中，呈棕褐色颗粒。组间比较显示：单照组在照射后半个月即明显上升（P=0.001），至第2个月达高峰，各实验点的表达均明显高于空白组（P

7、<0.05）。实验组的TGF-β1表达水平比单照组降低，在照射后2个月，实验组比单照组下降（P=0.002）。见表1。2．2．2Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白呈网状或条索状，主要分布在细支气管上皮下组织，肺间质及血管平滑肌中。单照组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平逐渐增强。组间比较显示实验组的表达水平明显低于单照组，Ⅲ型胶原蛋白从照射后2个月开始、Ⅰ型胶原蛋白从照射后3个月开始，下降与单照组比较有统计学差异（P=0.001）。见表2、3。2．3血浆TGF-β1结果单照组血浆TGF-β1含量在照射后1个月开始增加，高峰在照射后第2个月，以后逐渐回落至一偏

8、高水平。实验组的TGF-β1含量高峰延至照射后第3个月，且明显低于