hplc法测定独子藤中雷公藤红素的含量论文

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1、HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量论文刘慧琼，李国成,卢绮雯,王定勇【摘要】目的建立高效液相色谱法测定独子藤中雷公藤红素的含量，为雷公藤红素的药用植物资源开发提供依据。方法采用SupelcoDiscoveryC18柱(25cm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-5%(体积分数)H3PO4水溶液(体积比80∶20)，流速为1.0mL·min-1，检测波长为426nm。结果雷公藤红素在40~200μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9991)。独子藤中雷公藤红素的平均质量分数为0.0555%，雷公藤

2、红素的平均回收率为97.6%.freelinethecontentoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbbyHPLCfordevelopingthemedicinalresourcesofcelastrol.MethodsAnexternalstandardmethodbyHPLCn(25cm×4.6mm,5μm)ployed.Themobilephaseethanol-5%(φ)phosphoricacidsolution(80︰20)(ξ)atthefloL·min-1.Th

3、edetection.ResultsItshoL-1(r=0.9991).ThecontentoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbethodissimpleandaccurate,sensitiveandreproducibleandcanbeusedinthequalitycontrolofCelastrusmonospermusRoxb.ThecontentoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbonospermusRoxb;tripte

4、rine;HPLC;assay独子藤(CelastrusmonospermusRoxb.)为卫矛科南蛇藤属植物，分布于我国福建、广东、云南、贵州、广西等省区及越南和印度等地，主要生长于海拔1000m以上的林带中1。研究表明独子藤的化学成分主要为生物碱和木栓烷型三萜类化合物，其中木栓烷型三萜类化学成分对风湿病、白血病和皮肤病均有较好疗效2。雷公藤红素为木栓烷型三萜类化合物，是雷公藤片、雷公藤多苷片等治疗类风湿病制剂的有效成分之一,主要来源于中药雷公藤的根皮，具有抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等多种药理活性3。中美科学家于200

5、6年联合发现雷公藤红素的抗癌新机制4，引发了雷公藤红素抗癌活性研究的热潮。我们在独子藤的化学成分研究中发现该植物根中富含雷公藤红素，是一种潜在的雷公藤红素植物资源,具有重要开发价值。但至今尚未见有关独子藤中雷公藤红素含量测定的文献报道。本文建立了独子藤中雷公藤红素的含量测定方法，对合理开发独子藤植物资源、促进雷公藤红素的深入研究,均具有重要意义。1仪器与试药1.1仪器ShimadzuLC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SPD-10AT型紫外-可见检测器(日本岛津公司)，Hillipore溶液过滤器;Mil

6、lipore0.45μm滤膜;AY120电子分析天平(Shimadzu公司);RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。1.2试药雷公藤红素对照品(自制，经HPLC法测定纯度≥98%);独子藤于2008年10月采自广东省阳春市，由广东药学院李书渊教授鉴定为独子藤CelastrusmonospermusRoxb.;硅胶(柱层析硅胶，青岛海洋化工有限公司);甲醇为色谱纯;水为超纯水;其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：SupelcoDiscoveryC18柱(25cm×4.6mm，5μm);流动相：

7、甲醇-体积分数5%H3PO4水溶液(体积比80∶20);流速：1.0mL·min-1;检测波长：426nm;柱温：25℃;进样量：20μL。色谱图见图1。2.2对照品贮备液的制备精密称取雷公藤红素对照品5.0mg，置25mL容量瓶中，加适量甲醇溶解并定容，摇匀，得到质量浓度为0.20mg·mL-1的雷公藤红素对照品贮备液。2.3供试品溶液的制备取独子藤药材适量，粉碎过40目筛，精密称取10.0g，装入100mL带塞三角瓶中，加入三氯甲烷超声提取3次，每次50mL，每次30min。静置，滤取上清液，旋转蒸发仪上浓缩至干

8、。称取4.0g硅胶装柱(1.5cm×10cm)，以三氯甲烷1mL超声溶解样品，上样。先以三氯甲烷50mL进行洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇(体积比95∶5)100mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，旋转蒸发仪上浓缩至干。残渣用甲醇溶解并定容于50mL容量瓶中，045μm微孔滤膜滤过。平行操作5份，作为1~5号供试品溶液。PSd041;S*2