芪丹通脉片抑制缺血2f再灌注心肌损伤作用及其信号通路机制

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1、第四军医大学博士学位论文心肌细胞凋亡指数；化学比色法测定心肌组织中的NOS活性；免疫组化检测心肌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达；Westernblot测定心肌组织中ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果发现：不同剂量芪丹通脉片(1.08g/kg,3.24g/kg)预处理可抑制I/RI中心肌细胞凋亡，其凋亡指数分别为14.3±3.8%和10.6±2.0%,与模型组(21.3±4.2%)比较均存在显著性差异(P﹤0.05;P﹤0.01)。心肌组织中的iNOS活性显著高于假手术组(0.7484±0.1906U/mgprotvs0.34

2、54±0.1362U/mgprot,P<0.01)，不同剂量芪丹通脉片预处理后可降低再灌注后iNOS的活性,以芪丹通脉片(3.24g/kg)组显著(0.4204±0.1351U/mgprotvs0.7484±0.1906U/mgprot,P<0.01)；与模型组比较，不同剂量的芪丹通脉片预处理后均能够显著增加cNOS活性(0.5827±0.1680U/mgprotvs0.3010±0.0617U/mgprot,P<0.05；0.7618±0.2077U/mgprotvs0.3010±0.0617U/mgprot,P<0.01)。手术组中

3、NOS活性均较假手术组增高，但芪丹通脉片预处理组中NOS的活性与模型组无差异性差异（P>0.05）免疫组化研究结果发现：假手术组中Bcl-2和Bax均有少量表达，模型组较假手术组Bcl-2和Bax表达明显增加，平均灰度质明显下降(P<0.05；P<0.01)。模型组Bcl-2平均灰度质为165.17±9.21；不同剂量芪丹通脉片1.08，3.24g/kg预处理后缺血/再灌注心肌组织中Bcl-2的平均灰度值分别为147.82±19.51和118.65±16.31，平均灰度较模型组明显降低(P<0.05；P<0.01)；模型组Bax平均灰度

4、值为139.43±11.70，芪丹通脉片(1.08，3.24g/kg)预处理后Bax-2的平均灰度值分别为151.67±16.69和160.71±19.82，二者的灰度值与模型组比较有降低，但无显著性差异。通过Westernblot检测芪丹通脉片预处理对I/RI大鼠心肌ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达的影响，结果显示：芪丹通脉片组中ERK1/2的表达水平第四军医大学博士学位论文与假手术组、模型组中的表达水平无显著差异(P﹥0.05)；芪丹通脉预处理组中pERK1/2的表达水平明显增加；其中3.24g/kg芪丹通脉预处理组与模型组比较

5、，pERK1/2增加2.1倍(503.75±102.76a.uvs244.25±146.00a.u,P<0.01)。以上研究结果表明：芪丹通脉片预处理能够减少缺血/再灌注心肌细胞的凋亡，这种抗凋亡的作用机制与改变心肌组织中不同NOS活性、调节细胞中抗凋亡蛋白的表达有关。芪丹通脉片对这些分子的调节效应与通过其增强磷酸化ERK1/2的表达水平、提高该蛋白激酶的活性可能存在相关性。3芪丹通脉片抑制缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡与PI3K/Akt相关性的研究SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪丹通脉片组和芪丹通脉片加PI3K/Akt抑制剂组。I/

6、RI大鼠模型复制方法同前，用TUNEL法检测并计算再灌注后心肌细胞凋亡指数，Westernblot测定心肌组织中PI3K/Akt蛋白激酶的表达和活性，观察再灌注前给与PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002对芪丹通脉片预处理组保护心肌、抑制再灌注损伤作用的影响。结果发现：芪丹通脉片预处理可使再灌注心肌细胞凋亡指数从模型组的20.3±4.5%减少至11.6±2.3%，二者存在显著差异(P﹤0.01)。再灌注前给于相应溶媒的假手术组，模型组和芪丹通脉片预处理组与再灌注前应用LY294002的芪丹通脉片预处理组中心肌组织中PI3K，A

7、kt的表达水平无显著性差异，芪丹通脉片预处理组中心肌组织pAkt表达水平2.5倍，再灌注前给与LY294002的芪丹通脉片预处理组凋亡指数较芪丹通脉片预处理组增加，两者存在显著差异(17.0±5.5%vs11.6±2.3%，P﹤0.05)，与模型组凋亡指数(20.3±4.5%)比较没有显著性差异(P﹥0.05)，同时抑制芪丹通脉片预处理诱导增加的p-Akt的表达水平。第四军医大学博士学位论文以上结果表明：抑制p-Akt的表达水平阻断芪丹通脉片预处理的抗凋亡效果，PI3K/Akt信号活化是芪丹通脉片抑制缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡的重要

8、信号途径。综上所述，本研究结果证实了芪丹通脉片预处理对I/R大鼠心肌的保护作用。这种保护作用与芪丹通脉片调节心肌组织中不同NOS活性和增加抗凋亡蛋白的表达有关，而芪丹通脉片抗凋亡效应分子活化依赖于再灌注损伤