芪丹通脉片对急性缺血再灌注大鼠心肌信号转导系统pi3k论文

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1、芪丹通脉片对急性缺血再灌注大鼠心肌信号转导系统PI3K论文李军昌，王宗仁，王跃民，王文，王文勇，王长海，姚菊峰【摘要】目的观察中药芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积、细胞凋亡和细胞信号转导系统中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)和芪丹通脉片预处理组。生理盐水或芪丹通脉片灌胃7d后，大鼠麻醉开胸.freelin，再灌注4h。伊文氏兰和TTC染色测定心肌梗死范围，计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值(

2、%,IS/AAR)；TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数；T)onmyocardiumischemiareperfusioninjuryandsignalpathitogenactivatedproteinkinasep42/44extracellularsignalregulatedkinases(Erk1/2).MethodsMaleSpragueDaly:sham,ischemiareperfusion(model)andQDTMTtreatment.Theanimalsalsinmycardialischemi

3、afolloinisteringsalineinshamandmodelorQDTMTfor7d.TheareaatriskandinfarctsizeinedbyEvansblueandtriphenyltetrazoliumchloridemethods;cardiacmyocyteapoptosisinedbothqualitativelyandquantitativelybyterminaldeoxynucleotidyltransfeasemediateddUTPbynickendlabelinganalysismet

4、hods.TheexpressionofPI3KsignalingcascadeandErk1/2inedbyTmaybeabletoprotecttheheartagainstreperfusioninducedinjurymediatedbytheincreaseofphosphorylatingAktandErk1/2.KEY6200多导生理记录仪，成都仪器设备厂)。在胸骨左侧约0.5cm处从第3至5肋纵行切口开胸，剪开心包，暴露心脏，以左冠状动脉主干为标志，在左心耳根部下方2mm处用无创小圆针穿过左冠状动脉左前降支根部下方的

5、心肌表层，穿50线，将缝合线穿过小硅胶管后备用；待心电图恢复稳定10min后记录正常参数。在硅胶管远端的收紧缝合线至硅胶管形成弓状并固定，以阻断左前降支阻断血流造成缺血，以心电图ST段和(或)T波抬高或降低等心肌缺血波形为结扎成功指标，缺血40min，松解并除去硅胶管和多余缝合线，恢复左冠状动脉前降支实现血再灌注，逐层缝合胸壁,恢复自主呼吸。1.4实验方案将大鼠随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组和芪丹通脉片处理组。假手术组，动物开胸，冠脉下穿线但不结扎。模型组和假手术组均给予生理盐水10mL/(kg·d)灌胃，芪丹通脉片处理组给予

6、芪丹通脉片浸膏混悬液灌胃3.24g/(kg·d),10mL/(kg·d)。第7天，灌胃完成30min后开始造模。1.5心肌梗死范围的测定实验结束时，重新结扎包绕冠状动脉左降支，经颈动脉快速注入10g/L伊文氏兰染色区分缺血区和非缺血区(显示为兰色),.freelin后在结扎线以下，以心脏长轴等份4-5份，切片，经10g/LTTC(triphenyltetrazoliumchloride)37℃孵育30min区分坏死区呈不着色，缺血区呈砖红色，数码摄像，通过Optimax图象处理软件进行分析，并计算梗死面积(infarctsize,IS

7、)与缺血区面积(areaatrisk,AAR)的比值(%,IS/AAR)1.6TUNNEL法检测心肌细胞凋亡情况再灌注结束，迅速剪下心脏，置于冰的PBS中洗净残血，分离左心室前壁缺血区，40g/L的多聚甲醛固定12h，石蜡包埋。应用TUNEL凋亡检测试剂盒，严格按照原位细胞凋亡检测试剂盒(POD)说明书进行操作。以已知阳性切片作为阳性对照，在染色过程中用PBS代替TdT反应液作为阴性对照。每张切片于缺血部位随机选取8个高倍视野，分别记数凋亡心肌细胞数和心肌细胞总数，并进行汇总，以凋亡心肌细胞数占心肌细胞总数的百分比作为凋亡指数(apo

8、ptoticindex,AI)，AI=凋亡细胞数/心肌细胞总数×100%。1.7,GottliebRA.Functionalandclinicalrepercussionsofmyocyteapoptosisinthem