五柴颗粒中五味子甲素的小鼠血清药动学研究论文

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1、五柴颗粒中五味子甲素的小鼠血清药动学研究论文郭庆英王振华张长水陈扬张兆强【摘要】目的研究五柴颗粒中五味子在小鼠体内药物代谢规律。方法小鼠灌胃给予五柴颗粒2g/kg,在不同的时间点采血样,用高效液相色谱(HPLC)方法分析五柴颗粒和血清样品中五味子甲素成分,测定五味子甲素浓度的经时变化,绘制浓度-时间曲线图。结果五柴颗粒中五味子的主要成分是五味子甲素,其平均含量为3.13mg/g;小鼠给予五柴颗粒后,血清中检测到五味子甲素含量在5,10,20.freelin分别为1.07,1.14,0.59,0.51μg/ml。结论五柴颗粒中五味子可吸收进入体内,其在体内吸收和消除速度均比较快,符合线性动力学规

2、律。【关键词】五柴颗粒;五味子;药物动力学;高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTostudypharmacokiicsofschizandrinininethodsAfteroraladministrationofADZUVP-ODSC18(150mm×4.6mm,5μm);流动相为超声脱气15min的甲醇;流速1ml/min;柱温40℃;检测波长250nm。2.2标准溶液的配制用电子分析天平准确称量干燥的五味子甲素标准品5.0mg,用甲醇定容至10ml。此时所得标准品溶液浓度为500μg/ml,将此浓度标准品规定为1号标准品,然后对1号倍稀得`2号标准品,用同样的方法分别得到

3、3,4,5,6,7,8号标准品。2.3样本的处理2.3.1五柴颗粒中五味子甲素的含量测定精确称取5g五柴颗粒溶于50ml双蒸水,经超声混匀配成100mg/ml的溶液按上述色谱条件进行分析,测定五柴颗粒中五味子甲素含量。2.3.2空白血清和含药血清的制备取昆明种小鼠10只,其中两只作为空白血清组,其余作为含药血清组。含药血清组按照0.2ml/10g体重分别给8只小鼠灌胃五柴颗粒100mg/ml的混悬液,于5,10,20,30min分别给两只小鼠摘眼球取血;空白血清组以同样方法取血。5组血样立即12000r/min离心15min(4℃),用微量移液器分别取0.2ml上清液加入空离心管中,并分别加入

4、0.4ml甲醇12000r/min离心15min,再将上清液转移到空离心管中,加入0.4ml甲醇,于12000r/min离心15min,上清液转移至空的离心管中,80℃水浴至干,用甲醇定容至100μl,即分别为空白血清组和含药血清组。2.4色谱行为分别取不同浓度的标准品和处理后的五柴颗粒和小鼠血清样品20μl,按以上色谱条件分别进样,绘制色谱图,在该色谱条件下,五味子甲素的保留时间为2.69min,在该处,该峰独立,并且与其他物质无干扰。见图1~3。2.5线性关系考察分别精密吸取五味子甲素对照品溶液20μl的,按上述色谱条件进行测定,记录峰面积,以峰面积为横坐标,浓度为纵坐标,绘制标准曲线。结

5、果表明五味子甲素回归方程为Y=2.125X,r2=0.996265,五味子甲素在3.9~500μg/ml范围内呈良好线性关系,RSD=8.298%。结果见表1。表1五味子甲素对照品线性关系实验2.6重复性实验取五柴颗粒6份,分别制成供试品溶液,按样品测定方法测定,结果五味子甲素平均含量为0.313mg/ml,即五柴颗粒中五味子甲素含量为3.13mg/g,RSD%为3.93996。结果见表2。表2重复性实验2.7加样回收率实验取上述测定完含量的五柴颗粒0.5g,配制成10ml的溶液,取1ml分别与3,4,5,6标准液1ml混合,制成供试液,按上述色谱条件测定含量,并计算回收率。结果见表3。2.8

6、血清五味子甲素浓度经时变化小鼠灌胃五柴颗粒溶液后,血清成分谱见图2,通过与五柴颗粒及空白血清对比分析,并经标准对照品确认,血清中可检测到五味子甲素;各个时间段的血清样品按同标准品同样的方法进样,根据各样品的图谱所对应的峰面积以及标准曲线,计算出各样品的血清五味子甲素的浓度(见表4),绘制浓度-时间曲线(见图4),可见五味子甲素在本次研究中先出现浓度随着时间延长而上升,说明在该段时间内五味子甲素虽然在代谢,但是其吸收量大于代谢量;而当达到一定时间时,其吸收量不足以补充代谢量,出现其含量的下降。3讨论为了阐明五柴颗粒中五味子甲素在体内的药物动力学规律,对五柴颗粒体内外成分进行了分析,结果表明五柴颗

7、粒中主要药物为五味子,且吸收进入血液的主要成分以五味子甲素为主。在本次实验中有两点需要注意:①由于五柴颗粒溶解度低,且五柴颗粒中五味子含量低,因此小鼠的灌胃量要增大,并且血清需要浓缩以提高其中的药物浓度;②血样处理时需要用甲醇沉淀其中的蛋白质直到血样变为无色澄清为止。表3五味子甲素的回收率实验表4不同时间段血清五味子甲素浓度本研究还阐明了五柴颗粒中五味子甲素在小鼠体内代谢规律,结果表明,在5~10

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