雌激素对穹隆海马伞切断大鼠脑内nachr的干预作用

《雌激素对穹隆海马伞切断大鼠脑内nachr的干预作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、雌激素对穹隆海马伞切断大鼠脑内nAchR的干预作用作者：张延霞，郭宗君，崔瑞耀，骆刚【摘要】目的以双侧穹隆海马伞切断制作阿尔茨海默病（AD）大鼠模型，观察脑内海马CA1区和皮层区烟碱型乙酰胆碱受体（nAchR）表达的变化，探讨与AD相关的发病机制，并观察雌激素的干预作用。方法健康雌性ethodsHealthyfemalebria/fornixtransectiongroup,(2)estrogentreatmentgroup,and(3)controlgroup.Therebria/fornixodelsade.Immunoreactivecellsmunohistochemicalmuno

2、reactivecellscouldbeobservedinhippocampusCA1andcortex.ResultsInfimbria/fornixtransectiongroup,theexpressionofnAchRobviouslydecreasedintheobservedareasofthebrain(P<0.05).Inestrogentreatmentgroup,theexpressionofnAchRincreasedremarkably(P<0.01).ConclusionThecellsexpressingnAchRclearlydecreaseinth

3、eareasofCA1andcortexofratsbria/fornixistransected,butthecellnumberincreasessignificanlyifectogenicestrogenisadded.ThechangeinnAchRiscloselyrelativebriafornix;transection;nicotinicacetylcholinereceptor;estrogen;Alzhelmer'sdisease阿尔茨海默病（Alzheimer'sDisease，AD）是一种以认知记忆障碍为主要特征的进行性神经系统疾病。其特征性病理改变为老年斑，神经元

4、纤维缠结及神经元丢失以及多种神经递质和受体的改变。AD是神经系统进行性退行性疾病，其病因可能是多源性的，其中，乙酰胆碱受体与AD发病有密切的关系[1]。研究表明，雌激素与AD有密切关系[2]。本实验利用穹隆海马伞切断的方法模拟制作AD大鼠模型，观察AD发生时和给予外源性雌激素（E2）时，大鼠脑内海马CA1区和皮层区烟碱型乙酰胆碱受体nAchR表达的改变，进一步研究E2与nAchR的关系以及作用机制，从而为临床E2治疗AD提供理论基础。　　1材料和方法　　1．1实验动物和分组　　健康雌性g/kg，ip）麻醉后，将大鼠固定于江湾IC型脑立体定位仪，按常规消毒、剪毛、正中切开头皮，暴露出颅骨，参照

5、Paxinos和m，中线外1mm处，用电动开颅器凿开颅骨，切开硬脑膜，用自制双刃刀先置于上述部位的脑表面，接着降刀4．5mm，外移1mm，然后再降刀1mm，外移1．5mm，最后上下抽动刀约20次，以保证海马伞外侧缘完全切断。清洁颅面，缝合头皮，常规饲养[5,6]。　　122动物灌注、固定、取材　　模型大鼠经10%的水合氯醛腹腔麻醉，开胸，心脏灌洗，生理盐水250ml，快速冲洗2min，冲净血液后，4%的多聚甲醛灌注固定5~10min后，断头取脑，锯开颅盖骨，剪开硬脑膜，切下组织块放入4%的多聚甲醛后固定30~40min，常规脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。　　123免疫组织化学染色检测（S

6、ABC法）　　切片入nAchR抗体（1：200，博士德公司）孵育4℃过夜，或37℃孵育1h，入生物素化兔二抗（中山公司）孵育2h，入ABC复合物（中山公司）孵育2h，上述每步之间均经0．01mol/LPBS溶液漂洗3次，每次10min。DAB呈色，脱水透明、封片，光镜观察。阴性对照：用0．01mol/LPBS代替一抗，其余步骤相同。免疫组化阳性细胞计数：nAchR阳性细胞为胞浆内呈棕黄色颗粒，与背景对比度明显。在显微镜下，记录阳性细胞数量，并拍照。　　1．3雌激素补充疗法[7]　　雌激素治疗组模型制作方法同穹隆海马伞切断组，其后应用雌二醇E2（1mg/kg），每7d给予皮下注射1次，共30d

7、。观察补充外源性雌激素对nAchR的干预作用。　　1．4实验数据与统计处理　　在高倍镜下（400倍），海马CA1区和皮层区随机各取5个视野计数阳性细胞，平均计算单个视野中阳性细胞个数，用均数±标准差(±s)表示。各组数据间比较用计算机SPSS11．0软件做统计分析，然后两组数据间比较用t检验，P＜0．05为差别有显著统计学意义。　　2结果　　对照组大鼠脑内海马CA1区、皮层区nAchR有基础水平的