麦角菌hcb01712生物合成香草酸甲酯论文

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1、麦角菌HCB01712生物合成香草酸甲酯论文【摘要】从麦角菌(Clavicepssp.)HCB01712的发酵液中分离纯化得到化合物HCB017122，经理化分析、紫外吸收、质谱及核磁共振谱分析，确定该化合物为香草酸甲酯。微生物发酵产生香草酸甲酯未见报道。本研究首次从麦角菌发酵代谢产物中发现香草酸酯，有望替代昂贵的植物来源而成为安全的天然绿色产品。【关键词】麦角菌生物合成香草酸甲酯纯化鉴别MethylvanillateproducedbyClavicepsHCB01712ABSTRACTThepoundHCB017122hasbeenisol

2、atedfromthebrothofClavicepsHCB01712,bytheanalysesofitsphysicochemicalproperties,UV,ESIMSandNMRspectradata,thestructureofHCB017122hasbeenidentifiedasmethylvanillate.Itisthefirstreportofmethylvanillateproducedbymicroorganisms.KEYethylvanillate;Purificationandidentification香草酸酯类

3、(如香草酸甲酯及香草酸乙酯)是一类用途十分广泛的香料，不仅可作为香水、护肤护发品、化妆品、理发用品、空气清新剂、止汗露及房屋除臭剂等化工产品的添加剂［1］，还可作为许多食品的调味剂，是食品、烟草、调味品和日化香精的很好定香剂。香草酸甲酯还是合成很多药物和化工产品的原料和前体物质。目前，绝大多数香草酸甲酯来源于化学合成.freelicroYAO19；紫外及HPLC使用Agilent公司DE11108479泵和DAD检测器。柱层析硅胶为山东黄海化学试剂厂产品，薄层层析板为Merck公司生产的GF254硅胶板。所用试剂为分析纯。香草酸甲酯标准品为Across公司

4、生产的methylvanillate(≥99%)。2结果与讨论2.1发酵提取和样品制备取麦角菌HCB01712菌丝浸泡液经旋转蒸发仪(N1001型)浓缩，以丙酮∶石油醚(10∶1)溶解，拌入适量硅胶(200～300目)，干燥后装入已用石油醚∶丙酮(100∶1)预先平衡好的硅胶柱中，用石油醚∶丙酮(10∶1)系统恒定洗脱，分部收集，每个流分约10ml，收集合并第18～21流分，浓缩蒸干，得到HCB017122粗品Ⅰ。发酵上清液用乙酸乙酯萃取，所得萃取相经旋转蒸发仪(N1001型)浓缩，得浓缩液。将浓缩液直接上硅胶层析柱，以石油醚∶丙酮(50∶1)，

5、石油醚∶丙酮(10∶1)以及石油醚∶丙酮(9∶1)进行梯度洗脱，分部收集，每个流分约10ml，合并第6～23流分，经浓缩结晶得到HCB017122粗品Ⅱ。将HCB017122粗品Ⅰ和Ⅱ合并，得到粗品Ⅲ，将粗品Ⅲ加入已用石油醚∶丙酮(100∶1)预先平衡好的硅胶柱(40cm×1.5cm)中进行第二次层析分离，梯度洗脱，洗脱系统为石油醚∶丙酮(100∶1)，石油醚∶丙酮(50∶1)，石油醚∶丙酮(40∶1)；收集第16～22馏分，合并浓缩后得到黄色油状物质(样品Ⅳ)，经HPLC分析，HCB017122的纯度在95%以上。样品Ⅳ经制备高效液相进一步纯

6、化，浓缩干燥得白色固体，供精密波谱分析和化学结构确定，其HPLC纯度分析见Fig.1。2.2HCB017122的理化性质该化合物为白色粉末，易溶于乙醇或丙酮等有机溶剂，难溶于甲醇，不溶于水，结果见Tab.1。2.3结构解析(1)紫外吸收特征HCB017122化合物的紫外吸收波长为220、265和295nm(Fig.2)，其中220nm吸收值最大，与标准品香草酸甲酯的特征吸收一致。(2)ESIMS检测结果根据ESIMS图中183.09(M+H)和205.07(M+Na)峰，可判定该化合物分子量为182。该分子量与香草酸甲酯的分子量相同。(3)NM

7、R分析结果HCB017122的1HNMR图中有3个烯氢质子δ7.55(1H，d)、6.93(1H，d)和7.63(1H，dd)，依次对应于2、5和6位碳；2个甲基δ3.88(3H，s)和3.94(3H，s)含有6个碳甲基质子，分别对应于8和9位碳；4位碳上的羟基质子对应于δ5.96(1H，bs)(Tab.2)。结果与香草酸甲酯的结构相符。HCB017122的13CNMR(400MHz，CDCl3)谱中含有9个碳原子，其中有2个甲基碳原子δ51.85和56.18，4个烯碳原子δ122.45、111.91、114.12和124.28，1个羰基碳原子

8、δ166.83和1个连氧碳原子结果与香草酸甲酯相一致。2.4HCB