马齿苋黄酮提取及生物活性研究论文

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1、马齿苋黄酮提取及生物活性研究论文刘华，李玉萍，周春丽黄婷，孙笑颜【摘要】目的研究马齿苋黄酮的抑制脂肪堆积和抗氧化能力。方法用前脂肪细胞模型及羟基自由基抗氧化模型测定马齿苋黄酮体外影响前脂肪细胞3T3-L1增殖及其清除羟自由基能力。结果高浓度马齿苋黄酮(200μg/ml)极显著抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖。当马齿苋黄酮浓度大于0.061mg/ml，随浓度增加，其清除羟自由基能力增强;浓度为0.119mg/ml时清除率达50%，相当于0.130mg/ml的维生素C溶液。结论马齿苋黄酮有较强体外清除羟自由基能力，高浓度(100μg/ml)时

2、具有显著抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖的能力。【关键词】马齿苋黄酮;3T3-L1;增殖;清除羟自由基Abstract：ObjectiveTostudytheantioxidantandfatinhibitoryabilityofPortulacaoleraceaL.Flavonoids.MethodsInhibitoryactivitytoPreadipocyteproliferationandantioxidantactivityofflavonoidsextractedfromportulacaoleraceaL.l.Further

3、more,.freelg/mL,besides,shoecapabilityofscavenginghalfofhydroxylradicalsattheconcentrationof0.119mg/mlparedg/mlVitaminC.ConclusionPortulacaoleraceaL.FlavonoidshasstrongOH.Scavengingabilityandcansignifigantlyinbibit3T3-L1proliferationathighconcentration(100μg/ml).KeyoForm

4、aSeries-Ⅱ，美国Thermo);全自动酶标仪(MultiscanMk3，Labsystems)，紫外分光光度计UV2000(上海)。2方法2.1马齿苋黄酮的提取2.1.1黄酮提取参照周春丽等2的研究方法。2.1.2黄酮标准曲线采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法测定总黄酮，精确称取芦丁标准品8mg，至50ml量瓶中，加60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得芦丁标准溶液。用移液管准确吸取0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0ml的芦丁标准液分别置于10ml的容量瓶中，加入水2

5、～4ml，加入5%亚硝酸钠0.3ml，摇匀，放置6min，加入10%硝酸铝0.3ml，摇匀，放置6min，加入1.0mol/L氢氧化钠4.0ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光值A。用最小二乘法做线性回归，求得芦丁浓度与吸光度A的关系曲线。2.2MTT法测定马齿苋黄酮对前脂肪细胞3T3-L1增殖的影响取对数生长期的3T3-L1细胞，0.125%胰酶消化，用含10%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞浓度。将细胞接种于96孔细胞培养板，37℃，5%CO2培养2d。弃去孔中培养液，添加含不同浓度(25，50，100，

6、200μg/ml)马齿苋黄酮(溶于DMSO)的培养液，对照组为含0.1%DMSO的培养液，每种样品每个浓度设3个平行，培养24h后测定马齿苋黄酮对细胞的抑制值。每孔加入20μlMTT液，37℃继续培养4h，弃去孔中液体，每孔加入150μlDMSO，充分振荡，在酶联免疫检测仪上测定492nm处吸光度。抑制率计算如下式：细胞增殖抑制率(%)=(1-实验组A492值/对照组A492值)×100%。2.3体外抗氧化试验-清除羟自由基活性3利用H2O2和Fe2+混合发生Fenton反应生成·OH，在体系内加入水杨酸捕捉·OH并产生有色物质，该物质

7、在510nm处有最大吸收。如加入具有清除作用的物质，便会与水杨酸竞争，使有色产物生成量减少。本实验在试管中依次加入6mmol/lFeSO42ml、分别加0.2mg/ml马齿苋黄酮溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0ml并补足至2ml，6mmol/LH2O22ml，摇匀，静置10min，再加入6mmol/L水杨酸溶液2ml，摇匀，静置30min后于510nm处测得不同黄酮浓度下的光密度Di;用水代替水杨酸测得黄酮的本底光密度Dj;用水代替抗氧化剂时测得空白对照光密度D0。阳性对照组为添加对

8、应量的1.0mg/ml维生素C。清除率按下式计算：清除率S(%)=1-(Di-Dj)/Do×100%2.4数据处理实验所得数据以±s表示，用SPSS13.0进行单因素方差分析与显著性检验。3结果3.1马齿苋