荧光分光光度法测定大黄中游离蒽醌的含量论文

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1、荧光分光光度法测定大黄中游离蒽醌的含量论文王佩琪，承伟，郭兴杰，范会瑜【摘要】目的采用荧光分光光度法，建立了大黄中游离蒽醌类成分含量测定的方法。方法以丙酮为溶剂，在λex=460nm和λem=540nm处测定荧光强度。结果测得游离蒽醌含量在0.25～3.0μg/ml范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为F=122.81C+46.224(r=0.9996),.freell，表明该法灵敏度高、重现性较好.freeletryforFreeAnthraquinonesinRheumemodiAbstrac

2、t：ObjectiveethodsTakeacetoneassolventagent,andλem=540nmdeterminationfluorescencestrength.ResultsFreeanthraquinonecontentsll.ThemethodeasuringlivepositionoffreeanthraquinoneinRheumemodiECC）及毛细管电泳色谱法（CEC）。色谱方法通常需要较长的分离分析时间，与之相比光谱法具有显而易见的快速特点；同时荧光分光光度法可用

3、于药物的微量或恒量物质分析，并具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简便等优点，因此在药物定量尤其是中药有效成分检测上的应用日趋广泛。已有利用荧光分光光度法测定中药决明子中总蒽醌含量测定的报道［1］。本实验利用羟基蒽醌的荧光特性，在丙酮溶液中，建立了中药大黄中游离蒽醌荧光测定的新方法。1仪器与试药1.1仪器电子天平（上海精密科学仪器有限公司FA1004型），KQ-500B型超声器（昆山市超声仪器有限公司），LD4-2型低速离心机（北京医疗离心机厂），RE-52A型旋转蒸发器（上海正荣生化仪器厂），

4、970CRT荧光分光光度计（上海精密仪器有限公司）。1.2材料1，8二羟基蒽醌对照品（中国药品生物制品检定所），95%乙醇（沈阳市东陵区红日化工厂）、丙酮（盛森试剂有限公司）均为分析纯，大黄药材（购自锦州市药材公司），水为亚沸高纯去离子水。2方法与结果2.1测定波长的选择用2ml3.1μg/ml的1，8二羟基蒽醌标准液在300～600nm波长范围内进行激发波长扫描，蒽醌的最大激发波长(λex)为460nm，固定该激发波长，扫描得发射谱图，得到其发射波长(λem)为540nm。结果见图1。图1蒽

5、醌标准液的激发波长和荧光波长（略）选择该最大激发波长和最大发射波长(即λex/λem=460nm/540nm)作为后继测定的工作条件。2.2标准曲线的制备精密称取105℃干燥至恒重的1.8二羟基蒽醌2.5mg置50ml棕色容量瓶中，加丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀得对照原液。精密量取对照原液0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml分别置10ml棕色容量瓶中，用丙酮定容，以丙酮试剂为空白，在λex=460nm和λem=540nm处测其溶液的荧光强度，结果表明溶液的荧光强度(IF)与

6、溶液浓度(C)在0.25～3.0μg/ml范围内呈良好的线性关系。见图2。图2游离蒽醌荧光强度标准曲线图（略）2.3条件考察2.3.1溶剂的影响选择丙酮、甲醇、氯仿试剂，考察了对反应体系的影响，结果表明样品在丙酮中荧光强度大、灵敏度高，且空白溶剂在此范围内几乎无荧光吸收(与文献报道一致［2］)，在激发波长为460nm、发射波长为540nm处，其拉曼光较小，对实验影响较小，图像也较直观，故本实验选用丙酮作溶剂，见图3。图3丙酮、甲醇、氯仿荧光效果图（略）2.3.2放置时间对游离蒽醌荧光强度的影响依照

7、分析步骤,测定放置不同时间后的1，8-二羟基蒽醌的相对荧光强度。结果见表1。从表1中可以看出,随着放置时间的延长，相对荧光强度逐渐减小，荧光强度在0～3h内基本稳定，因此应保证在3h内测定荧光。表1放置时间对游离蒽醌荧光强度的影响（略）2.4样品的测定2.4.1样品溶液的制备取摄氏60℃干燥1h的大黄粗粉80mg，加50ml95%乙醇，先在25kHz频率下超声20min，然后水浴上加热至微沸，回流1.5h，采用3000r/min的转速离心30min，取上清液，残渣再加50ml95%乙醇液加热回流3

8、0min，离心取上清液，合并两次上清液，浓缩后挥去乙醇，残渣加二次蒸馏水10ml，1mol/LNaOH2滴、氯仿15ml，分离后将水溶液于冰水浴中并加乙醚10ml、盐酸0.4ml后立即密封振摇3min，静止分层，如此方法萃取3次合并乙醚液，挥尽乙醚后加50ml丙酮，得样品溶液。2.4.2精密度实验分别精密吸取样品溶液1ml于5个10ml棕色容量瓶中，加丙酮定容。在λex/λem=460nm/540nm下测荧光强度。结果见表2。RSD为0.3%，表明该方法的精密度良好。表2精密度实验