藏药寨卡有效部位的分离鉴定及其抗肿瘤活性研究

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1、藏药寨卡有效部位的分离鉴定及其抗肿瘤活性研究作者：李艳，江南，罗霞，清源，许晓燕，杨志荣【摘要】　　目的分离鉴定藏药寨卡的有效部位并对其抗肿瘤活性进行初步研究。方法采用甲醇萃取、酸性氧化铝层析柱层析和谱图分析对寨卡有效部位进行分离提取和鉴定，采用S180荷瘤小鼠模型和CT-26荷瘤小鼠模型，探讨寨卡有效部位提取物的抗肿瘤活性。结果提取分离得到了寨卡中有抗肿瘤活性的有效部位，并经谱图分析鉴定该部位为硫代葡萄糖苷类。经抑瘤实验表明，其能明显抑制S180荷瘤小鼠和CT-26荷瘤小鼠的肿瘤增殖。结论硫代葡萄糖苷是寨卡抑制肿瘤增殖的有效部位，

2、具有一定的抗肿瘤活性。【关键词】寨卡；有效部位；硫代葡萄糖苷　　Abstract:ObjectiveToextractandidentifytheactivefractionoftheseedsofTibetMedicineThlaspiarvenseLinn.andtostudyitsantitumoractivities.MethodsTheactivefractionofThlaspiarvenselinnchromatography,TLCandHPLC.Theanti-tumoreffectousemodelofS180A

3、NDCT-26.ResultsTheactivefractionofThcaspiaruenseLinn.orpropagationofthetalmodels.ConclusionGlucosinolateistheactivefractionofThlaspiarvenseLinnandithasgoodantitumoreffects.　　Keym×300mm），蠕动泵（ARLO色谱柱，色谱工作站（天津），凝胶成像系统（BIO-RAD，GelDocXR）。　　1.2药材　　寨卡采摘收集自四川省阿坝藏族羌族自治州红原县，经四川省

4、中药研究所中药研究室鉴定为十字花科植物菥蓂ThlaspiarvenseLinn.的成熟种籽。　　1.3细胞系和实验动物　　S180（小鼠腹水瘤细胞）,由四川省中药研究所提供；CT-26（小鼠结肠癌细胞，ATCC编号：CRL-2638），购于南京凯基生物科技发展有限公司。昆明种小鼠，清洁级，雌雄各半，18～22g，由四川省中药研究所动物室提供（川实动质第2002-33号）；BALB/C纯种小鼠，雄性20～25g，由四川省成都中医药大学动物中心提供。　　1.4药品与试剂　　芥子苷（Sinigrin），购于Sigma公司；酸性氧化铝，购于

5、上海陆都化学试剂厂；甲醇、乙醇、Pb(Ac)2、Ba(Ac)2和KNO3等提取试剂及层析分析试剂均为国产分析纯；色谱试剂均为国产色谱纯。　　2方法与结果　　2.1寨卡有效部位的制备［3］　　2.1.1寨卡有效部位的提取　　将寨卡炒香，打粉，过40目筛，得到寨卡粉末。在充分搅拌下，将600ml甲醇中加热至微沸，缓慢加入200g寨卡粉末，加料完毕后继续于微沸状态下搅拌20～30min。待整个体系冷却，将其置于冰浴中使悬浮物完全沉降，收集上清液。固体残渣用600ml体积分数为70%的甲醇水溶液进行第2次提取，保持微沸状态下搅拌20～30m

6、in，冷却后，将其置于冰浴中使悬浮物完全沉降，收集上清液。合并提取液，加入其体积1/50的Pb(Ac)2-Ba(Ac)2溶液（0.5mol/L）沉降提取液中蛋白质。抽滤，滤液于40℃旋蒸浓缩至体积不再减少，以除去大部分甲醇，得棕色硫苷提取液。　　2.1.2寨卡有效部位的分离和层析纯化　　将“2.1.1”得到的浓缩提取液转入经蒸馏水平衡的酸性氧化铝柱中进行纯化，先用蒸馏水淋洗以洗净提取液中的有色杂质，再用1000ml0.1mol/LKNO3溶液淋洗，收集KNO3溶液淋洗的全部洗脱液进行旋转蒸发浓缩，至近干时加入约30ml的无水乙醇，继

7、续浓缩至干，得到白色固体。将固体样品溶入150ml甲醇中，达到平衡后滤去不溶物以除去其中的KNO3。滤液继续旋转蒸发至近干，溶于少量无菌水中，于-50℃下冷冻干燥，得到近似白色的固体粉末，即为寨卡有效部位提取物（activefractionsofpennycress，ZAF），精密称重，计算得率。ZAF得率（%）=ZAF重量/寨卡药材重量×100%　　2.2寨卡有效部位的谱图分析　　2.2.1薄层层析法鉴定寨卡有效部位纯度　　采用硅胶G板为层析板，展开条件为正丁醇∶乙醇∶氨水的比例为5∶1∶2。按比例配制展开剂。将4批次寨卡有效部位

8、提取物（ZAF）点样后进行薄层层析。层析完后在紫外光下显色，并用凝胶成像系统照像记录。　　2.2.2HPLC法检测寨卡有效部位含量　　采用HPLC法对寨卡有效部位提取物（ZAF）进行检测，采用峰面积归一化法检验含量。HPLC的试验条件