寨卡有效部位提取物论文

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1、寨卡有效部位提取物论文清源，江南，罗霞，曾瑾,许晓燕，葛绍荣【摘要】目的研究寨卡有效部位提取物体外抑制人结肠癌LoVo细胞的量效和时效关系，并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法寨卡有效部位提取物不同浓度、不同时间分别处理LoVo细胞，以MTT法和荧光显微镜观察其对细胞生长增殖的抑制作用，利用分光光度法检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活化程度。结果寨卡有效部位提取物对体外培养的人结肠癌LoVo细胞有明显的抑制作用.freell。Caspase-3和Caspase-9的活性与药物浓度呈正相关，当浓度为1000μg/ml时其活性与阳性药物组基本相当。结论寨卡有效部位

2、提取物在体外能有效抑制人结肠癌LoVo细胞的生长，并可能通过激活Caspase-3和Caspase-9诱导细胞凋亡。【关键词】寨卡；LoVo细胞；增殖；凋亡；Caspase-3；Caspase-9Abstract:ObjectiveToinvestigatetheconcentration-effectandtime-responseeffectofactivefractionsofPennycress(ZAF)againsthumancoloncarcinomaLoVocellandthepossiblemechanisminvitro.MethodsInvitroculturedhu

3、mancoloncarcinomacellLoVocellse,thenthegroethods,activitiesofCaspase-3andCaspase-9ancoloncarcinomaLoVocellsoresignificantlye,IC50550μg/ml.ZAFcouldactivateCaspase-3andCaspase-9inaconcentrationdependentmanner.ultiskan）。2方法2.1细胞增殖抑制实验采用MTT法［2,3］进行。每个孔5.0×104个细胞，每个剂量3个重复孔，作用72h，酶标仪于570nm波长处测定各孔吸光度（A5

4、70），细胞抑制率（%）=（对照组A－实验组A）/（对照组A－空白组A）×100%。以药物浓度的对数和抑制率作回归方程，计算IC50。实验重复3次。按前述同样方法，将同样细胞密度的LoVo细胞分别加入300，550，1000μg/ml的ZAF进行培养，根据药物作用时间分为5个组，即作用0，12，24，36，48h后，观察相同浓度ZAF在不同作用时间后对LoVo细胞的增殖抑制作用。实验重复3次。肿瘤细胞生长抑制率的计算方法同上。2.2双荧光染色分析法［4,5］对数生长期LoVo细胞按5×105个/皿接种于35mm培养皿，37℃培养24h，用不同剂量的ZAF作用48h，0.25％胰酶消化，离

5、心弃上清液，加入冷PBS洗2次，制成细胞悬液，吸90μl，加入10μl混合荧光染色液［100μg/ml吖啶橙（AO）和100μg/ml溴乙啶（EB）临用前等体积混合］，混匀，压上盖玻片，荧光显微镜下观察并摄像。2.3细胞凋亡的生化分析利用Caspase-3，9分光光度法检测试剂盒（购自南京凯基生物科技发展有限公司）对Caspase-3和Caspase-9的活化程度进行检测。设实验组、阴性对照和阳性对照组，其中实验组ZAF终浓度为300，550，1000μg/ml；阴性对照组ZAF终浓度为0μg/ml；阳性对照组为顺铂50μg/ml。3结果3.1ZAF对LoVo细胞体外抗增殖作用的量效关

6、系MTT结果显示，寨卡有效部位提取物抑制LoVo细胞具有浓度依赖性（图1），即药物浓度越大，对细胞的抑制越明显。作用72h时其IC50为550μg/ml。3.2ZAF对LoVo细胞体外抗增殖作用的时效关系MTT结果显示，寨卡有效部位提取物抑制LoVo细胞具有时间依赖性（图2），即相同药物浓度下，随药物作用时间的延长，细胞生长受抑制加重。3.3双荧光染色显微镜观察对照组细胞形态饱满，细胞质呈绿色，核为亮绿色，呈现荧光深浅不一的结构样特点。ZAF处理的细胞则出现凋亡细胞，并且随ZAF的剂量增高而增多：早期凋亡细胞细胞质呈绿色，细胞核染色增强，荧光明亮，呈均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构；

7、晚期凋亡细胞着橙色并呈团缩或串珠状，胞质染成红色（图3）。3.4Caspase-3，Caspase-9活化程度以ODZAF/OD阴性对照的倍数来确定给药组Caspase-3和Caspase-9的活化程度（表1）。从表1可看出，ZAF对Caspase-3和Caspase-9有明显的诱导激活作用，且存在明显的剂量依赖关系，随着药物浓度的增加，Caspase-3和Caspase-9酶活活化倍数增加明显。从该实验结果可知，ZAF可能是通过激