冰冻血小板对系统血液免疫功能影响的实验研究

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1、冰冻血小板对系统血液免疫功能影响的实验研究作者：胡慧红钱宝华郭峰花美仙查占山徐建林【摘要】目的：探讨不同冰冻血小板复温后对血液系统免疫功能的影响。方法：按不同的实验条件将血液反应系统分为4组，自体血小板组（自然体系对照组）、新鲜异体血小板组（自然体系实验组1）、新型血小板冷冻保护剂组（自然体系实验组2）、6%DMSO组（自然体系实验组3），以灭活S180作为激活抗原，采用免疫荧光标记流式细胞仪分析方法，检测血细胞表面相关免疫分子表达影响的变化规律。结果：血小板CD55和白细胞CD25表达水平，自然体系实验组1较自然体系对照组呈明显上调（P<

2、0.05），自然体系实验组2及组3均较自然体系对照组上调。血小板CD59表达水平，自然体系实验组1较自然体系对照组呈明显上调（P<0.05），自然体系实验组2及组3较自然体系对照组下调。红细胞CD59表达水平，自然体系实验组3较自然体系对照组呈明显下调（P<0.05）。结论：冰冻血小板对红细胞免疫反应性的抑制作用强于新鲜异体血小板，对血小板、白细胞免疫反应性的激活作用弱于新鲜异体血小板。【关键词】冷冻保存；血小板；CD55；CD41；CD59；CD25〔Abstract〕ObjectiveToinvestigatehoichemato

3、genicimmunologicalfunctionbymeansofcontemporarysystemicimmunologytheoryandmethodology.MethodsHematologicalimmunesystemsacellS180olecularsonthesurfaceofbloodcellseansofimmunofluorescencelabelingfloetry.ResultsTheexpressionofplateletCD55andmuneresponseofredbloodcellisstrongerth

4、anfreshallogenousplatelets.Theactivationofcryopreservedplateletstoimmuneresponseofplateletsanda，美国），腺苷（Amresco，美国），FITC标记抗人CD55、PE标记抗人CD59、CD25、PE/Cy5标记抗人CD41（BD，美国），新型冷冻保护剂的配制：阿米洛利0.0033g、硝普纳0.0007g、腺苷0.0013g，溶解于1mLDMSO中，在作为血小板冻存保护剂时，以1:50比例加入血小板，使得DMSO终浓度为2%[5]。1.2实验设计1.2.1

5、冰冻血小板的制备及分组设计采集10位健康合格献血员全血10mL（ACD-B抗凝），2000r/min离心5min获得富含血小板血浆（PRP），后将每份PRP按不同的冷冻保护剂等分为2组（n=10），分别应用6%DMSO（组1）、新型血小板冷冻保护剂（组2）作为冷冻保护剂分装至冷冻保护管中放入-80℃低温冰箱冷冻保存1周。1.2.2灭活癌细胞（S180）悬液的配制S180冰冻试剂（5×106细胞/mL）37℃水浴箱中解冻，2500r/min离心5min，用生理盐水调节S180浓度为4×106细胞/mL悬液待用。1.2.3新鲜血小板及全血细胞悬液的制

6、备1.2.3.1冷冻血小板的复苏方法从低温冰箱中快速取出上周冻存的冰冻血小板，直接放入37℃恒温水浴箱中复温，使其在1min内融化，备用。1.2.3.2富含血小板的血浆（PRP）及贫血小板血浆（PPP）的分离制备新鲜采集与冰冻血小板同血型的健康成人ACD抗凝全血10mL×2，2000r/min离心5min，吸取上层PRP至硅化管中备用。再从PRP试管中取出500L，3000r/min离心10min，吸取上层PPP至另一试管中备用。1.2.3.3全血细胞悬液的分离制备将上述全血细胞用0.9%生理盐水（NS）恢复原体积，混匀即为全血细胞悬液。1.2.

7、4系统免疫学自然实验体系的设计[6]试管1：0.2mLS180+0.3mL全血细胞悬液+0.2mL自体富含血小板血浆（自然体系对照组）；试管2：0.2mLS180+0.3mL全血细胞悬液+0.2mL自体贫血小板血浆（无血小板对照组）；试管3：0.2mLNS+0.3mL全血细胞悬液+0.2mL自体富含血小板血浆（无S180对照组）；试管4：0.2mLS180+0.3mL全血细胞悬液+0.2mL同型异体新鲜富含血小板血浆（自然体系实验1组）；试管5：0.2mLS180+0.3mL全血细胞悬液+0.2mL同型异体新型血小板冷冻保护剂冰冻血小板悬液（自然

8、体系实验2组）；试管6：0.2mLS180+0.3mL全血细胞悬液+0.2mL同型异体6%DMSO冰冻血小板悬液（自然体系实验3组）将上