聚酰胺树脂分离纯化芦荟蒽醌衍生物

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1、聚酰胺树脂分离纯化芦荟蒽醌衍生物作者：刘太平李芬芳邢健敏黄莹【摘要】　　目的研究纯化芦荟蒽醌衍生物的工艺条件。方法对照乙醇梯度洗脱所得各组分的HPLC谱图，考察聚酰胺树脂富集、纯化芦荟蒽醌的吸附性能和洗脱参数。结果通过聚酰胺树脂富集与纯化，并采用40%，60%，70%，80%乙醇梯度洗脱，可以使芦荟蒽醌衍生物得到较好的分离。结论该法的精确度、稳定性、重复性和回收率都较好,且操作简便易行。【关键词】芦荟蒽醌类衍生物聚酰胺树脂紫外-可见分光光度法高效液相色谱法　　Abstract:ObjectiveTostudythepurificationprocessofanthraquino

2、idpounds.MethodsTheabsorptivecharacteristicsandelutionparametersoftheprocessethod.Resultsideresintoabsorbandpurify,elutedethodisprecise,stable,repeatableandeasytooperate.　　Keyideresin;UV-VISspectrophotometry;HPLC　　芦荟为百合科芦荟属多年生长绿肉质草本植物,临床上常用于治疗创伤、哮喘、胃溃疡、便秘等症，其中芦荟蒽醌类及其衍生物倍受人们关注。近年来的药理和临床实验表明，蒽

3、醌类物质具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、降血糖血脂、调节免疫功能及调节血压等药理作用［1～4］。含芦荟蒽醌类成分的产品已出现在医药、保健、食品等市场。　　过去大都采用大量的甲醇反复多次提取，减压浓缩后用溶剂如苯、乙醚、正丁醇等依次提取蒽醌类物质，然后采用大孔吸附树脂进行初分，得到初分产物［5，6］。这种方法虽然可以除去部分干扰物质，但需要消耗大量有机溶剂，步骤繁琐，而且残留的甲醇、苯等有机溶剂，使得产品的使用范围受到一定的限制。采用聚酰胺柱层析技术，具有选择性好、机械强度高、吸附速度快、分离效果好，有机溶剂无残留等优点，在天然产物的分离与纯化中已经获得了广泛应用［7，8］，但用于分

4、离纯化芦荟蒽醌类物质尚未见报道。本研究以聚酰胺树脂为固定相，选择适当的流动相，应用常压柱色谱法对芦荟蒽醌类衍生物进行分离，旨在探索一种快速提取、分离与纯化芦荟有效成分的简单实用方法。　　1材料与方法　　1.1仪器和材料日本产LC-8A型高效液相色谱仪；北京普析通用仪器有限责任公司产70-1800SPC型紫外可见分光光度计；上海申生科技有限公司产R-201型旋转蒸发器；湘仪天平仪器厂产TG328A光学读数分析天平以及上海精密科学仪器有限公司生产电子天平(JY4001)。原材料芦荟由海南中和集团提供。　　1.2芦荟蒽醌类衍生物的提取取3.5kg芦荟鲜叶，洗净,剥取表皮及维管束部分,

5、切成3cm的方块,打碎成浆状,放入密闭的容器中,加入50%的乙醇溶液,避光浸泡24h。滤取清液,滤渣继续用50%的乙醇溶液浸泡两次,合并清液,转入1000ml的烧瓶中减压蒸馏除去乙醇和水,得到红褐色的芦荟胶状提取物。无水乙醇浸泡芦荟胶状提取物,芦荟多糖和树脂类析出。离心分离,得到清液。将清液转入1000ml烧瓶中减压蒸馏除去溶剂乙醇,得到浸膏。加入一定量20%硫酸溶液和氯仿(1:5体积比)混合液于芦荟浸膏中,在70℃的水浴锅中回流4h,倾出氯仿液。残渣再如法重复3次，合并氯仿液。蒸馏除去氯仿,得到黄褐色的胶状物［9］，即芦荟蒽醌类粗品。　　1.3蒽醌衍生物的分离纯化称取5g黄褐

6、色的胶状物,乙醇溶解,转入已经预处理好的聚酰胺树脂柱中。当蒽醌类衍生物被聚酰胺树脂吸附后,用蒸馏水洗涤至滤出液没有蒽醌类物质。然后以乙醇-水（体积比分别为20∶80；30∶70；40∶60；50∶50；60∶40；70∶30；80∶20；90∶10）作为流动相进行洗脱,流速为1.0ml/min，收集各个洗脱组分，用于下一步实验。具体操作过程见图1。　　1.4芦荟蒽醌衍生物的定性分析准确量取各洗脱组分各10ml，减压蒸馏除去溶剂，置于100ml容量瓶中，加0.8%醋酸镁-甲醇液至刻度线，摇匀。再以0.8%醋酸镁-甲醇液作空白液，采用70-1800SPC型紫外可见分光光度计，在50

7、8nm处测定吸光度［5］。　　1.5HPLC法测定芦荟蒽醌类物质含量色谱条件［10］：色谱柱为Nova-PakC18柱（150mm×4.6mm,i.d.）；流动相为25%～30%甲醇溶液(5min；线性递增),30%～35%甲醇溶液(10min；线性递增),35%～70%甲醇溶液(35min；线性递增),70%甲醇溶液(10min);流速：0.7ml·min-1;检测波长293nm;柱温25℃，进样量为20μl。　　2结果与讨论　　2.1HPLC法对聚酰胺树脂分离纯化芦荟蒽醌类衍生物效果的评