细胞趋化因子受体5在病毒性肝炎患者外周血单核细胞中的表达论文

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1、细胞趋化因子受体5在病毒性肝炎患者外周血单核细胞中的表达论文.freelokinereceptor5（CCR5）intheimmunologicalpathogenesisofhepatitisB（HB）.MethodsTheexpressionlevelsofCCR5inperipheralbloodmononuclearcell（PBMC）etrybeforeandafterPHA-inducedcultivationin20HBpatientsand20normalcontrols（NC）.ResultsBeforecultivation，therea

2、rkersthanthatinthoseayberelatedtotheouteofHB，andhigherlevelsofCCR5suggestrelativelyfavorableprognosisandlimitHBVreplication.Keyokinereceptor5趋化性细胞因子是细胞因子的一个超家族，其作用的发生是通过与趋化因子的受体结合，而趋化因子受体是属于G蛋白偶联受体超家族，含有7个疏水性穿膜区段的链受体。趋化因子及其受体是一个进展非常迅猛的研究领域，近年来不断有新的趋化因子及其受体被发现。细胞趋化因子受体5（CCchemokiner

3、eceptor5，CCR5）便是其中的一员［1～4］。研究发现，外周血细胞中CCR5的表达与艾滋病病毒感染有一定的关系，同时发现CCR5还可作为细胞表面标志物，与激活的辅助性T细胞亚群1（Th1）和细胞毒性T细胞亚群1（Tc1）细胞密切相关，而CCR5与乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染的关系鲜见报道。为了解乙型病毒性肝炎（hepatitisB，HB）患者体内的CCR5的表达状况，同时探讨CCR5在HB发病机制中的作用，本实验用流式细胞仪对HB患者外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC

4、）CCR5的表达水平进行了检测，部分作了细胞培养前后的观察。现将研究结果报道如下。1材料和方法1.1研究对象29例HB患者为2000年1月―9月徐州医学院附属医院传染科门诊及住院患者，HB诊断依据2000年西安第十次全国病毒性肝炎会议制定的诊断标准进行，并以20例健康人（NC）为对照。1.2方法29例HB患者静脉血检测CCR5，比较不同临床类型CCR5的水平。20例进行淋巴细胞分离培养，比较培养前后CCR5水平。20例检测HBV复制指标，比较不同复制情况下CCR5水平。1.2.1标本的收集与处理无菌采集静脉血10ml。4ml经肝素抗凝，用于淋巴细胞的分离培养

5、;1ml用EDTA抗凝，直接用于流式细胞仪检测29例。20例血清用ELISA及PCR法检测HBV复制指标:HBeAg和HBV-DNA。1.2.2细胞培养与收集常规分离PBMC，Hanks液洗3次，10%FCS-1640培养液调细胞浓度为2×109.L，接种于24孔细胞培养板，每孔1ml。做3个复孔。用植物凝血素（PHA）诱导其增殖，终浓度为200mg.L，置37℃、5%CO2孵箱中培养48h，培养后的细胞用PBS洗涤2次，最后用200μlPBS悬浮，待测CCR5。1.2.3流式细胞仪检测CCR5将相应CCR5阴阳性抗体加于2只空白离心管中，分别为阳性管和阴性

6、管，每管各加入抗凝外周血或培养后的细胞悬液100μl，充分混匀，4℃避光反应20min。在全血样本管中加溶血剂1ml，混匀放置5min;PBS洗涤，全血样本管洗3次，培养管洗1次;沉淀用200μlPBS悬浮，上流式细胞仪检测。CCR5抗体购自深圳晶美公司。1.3统计学处理所有数据采用ˉx±s表示，2组间比较用t检验，检验水准:α=0.05。2结果2.1PHA培养前后NC组与HB组的CCR5水平比较培养前，NC组与HB组PBMC的CCR5的表达无明显差异（P0.05）;培养后，HB组CCR5高于NC组（P0.05），培养后，HB组、NC组的CCR5表达较培养前

7、减少，HB组CCR5表达虽较培养前减少，但无统计学意义（P0.05），而NC组减少具有统计学意义（P0.05）。见表1。2.2不同临床类型肝炎患者的CCR5表达水平比较急性乙型肝炎（acutehepatitisB，AHB）8例、慢性乙型肝炎（chronichepatitisB，CHB）12例、肝硬化（liv-ercirrhosis，LC）9例患者PBMC的CCR5的表达有一定的差别，AHBCHBLC，但无统计学意义。见表2。表1NC、HB组CCR5水平比较（略）与NC组比较:*P0.05;与培养前比较:#P0.05表2HB不同临床类型PBMC的CCR5比较（

8、略）2.3CCR5与病毒复制的关系病毒复制指标阳性组