原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子1基因表达及意义

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1、原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子1基因表达及意义【摘要】目的：观察原发性高血压（EH）患者外周血单核细胞趋化因1（MCP1）基因表达，探讨其与EH的关系及意义。方法:用酶联免疫吸附（ELISA）法测定62例EH患者和30例正常对照者外周血MCP1蛋白含量，用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检测外周血单个核细胞中MCP1mRNA表达。结果：与对照组比较，EH组外周血MCP1蛋白含量及外周血单个核细胞MCP1mRNA表达均显著增高（P<0.01）。结论：(1)MCP1可能参与了EH的病理生理过程；(2)外周血单个核细胞的MCP1mRNA表达上调可能是EH患者

2、外周血MCP1蛋白含量增高的机制之一。【关键词】高血压趋化因子单核细胞基因表达逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定原发性高血压（essential8hypertension，EH）是常见的心血管疾病，也是导致心脑血管疾病的重要危险因素。近年来，越来越多的学者认为EH是一种与遗传、环境、代谢极为相关的复杂疾病[1～3]，当EH与其他相关危险因素并存时，单纯的血压控制只能使不到60%的患者获益，而危险因素的干预才能获得更大的益处。因此，积极探讨EH的发病机制及其影响因素，对更有效的控制EH，减轻其危害已成为医务工作者的共识。有学者研究发现，炎症可能在EH的发病机制中起着重要的作用[4]，20

3、07年2月～12月实验检测EH患者外周血单核细胞趋化因子1（monocytechemotacticprotein1，MCP1）蛋白水平及单个核细胞MCP1mRNA的表达，探讨外周血MCP1的变化与EH的关系。1对象与方法1.1对象及分组　　按《中国高血压防治指南（2005年修订版）》[5]制定的标准，选取心血管科住院和门诊新诊断或未经正规降压治疗的EH患者62例，同时选取血压正常的30例健康体检者作为对照组。排除继发性高血压、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血症、感染、严重肝肾疾病、自身免疫性疾病及肿瘤性疾病，排除近期有手术或外伤史等影响MCP1的因素。1.2方法1.2.1主要试

4、剂和仪器人淋巴细胞分离液（上海捷瑞），Trizol试剂（美国Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞兴），逆转录试剂盒（Promega），PCR试剂盒（Promega），100bpDNALadderMarker、D2000DNAMarker（天根生化），人MCP1ELISA8试剂盒（美国R＆D公司）；ULT13863三洋-80℃低温冰箱(日本)，5745台式冷冻离心机(德国)，Eppendorffcentrifuge5810R高速离心机，Amersham核酸蛋白分析仪，PCR仪（PEgeneAmpPCRSystem2400）（PerkinElmer），DNA成像分析仪（GelDoc

5、EQ，BioRad），酶标仪（ELx800，BioTek公司）。MCP1引物设计由上海生工合成，上游引物5'AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG3'，下游引物5'–AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG3'；βaction：上游引物5'AGCGAGCATCCCCCAAAGTT3'，下游引物5'GGGCACGAAGGCTCATCATT3'。1.2.2标本采集受检者空腹12h，于次日清晨6∶00～7∶00采集肘正中静脉血8ml，其中4ml置普通生化管中，室温静置2h，自然凝固后予离心10min，1000r/min收集上清液置于-80℃冰箱保存待测；另4ml置于

6、EDTA抗凝试管中摇匀后即刻置40℃冰箱冷存，于6h内提取RNA用。1.2.3外周血MCP1蛋白含量测定用保存待测的血清，依照MCP1ELISA试剂盒说明书的步骤操作。用酶标仪检测450nm波长下各孔吸光度，根据吸光度值计算标本中MCP1的浓度。1.2.4人血单个核细胞中RNA提取和逆转录聚合酶链反应（RTPCR）8淋巴细胞分离液提取外周血中单个核细胞后，按照说明书的步骤提取总RNA；按逆转录试剂盒说明书步骤合成cDNA，并用PCR技术扩增目的片段，PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶跑电泳，溴乙锭显色。测定各条带灰度值，以βactin为内参，用MCP1与βactin的灰度比值

7、定量MCP1。1.2.5统计学处理采用SPSS11.5统计软件进行数据分析处理，数据以（x±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。2结果2.1一般资料EH组及对照组的一般资料见表1。两组研究对象的年龄、性别、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、空腹血糖和外周血白细胞比较，无统计学差异。表1EH组及对照组的基本资料注：TC示总胆固醇，TG示甘油三酯，FBG示空腹血糖，L