应用抑制性消减杂交技术从枳中筛选根特异表达基因

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1、园艺学报，（）：–2014411224812488http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com收稿日期：2014–07–22；修回日期：2014–11–02基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-27）；国家高技术研究发展（‘863’）计划课题（2011AA100205）；重庆市基础与前沿研究计划项目（cstc2013jcyjA8）；中央高校基本科研业务费专项资金项目（XDJK2013C104，XDJK2014A018）*Authorfo

2、rcorrespondenceE-mailchenshanchun@cric.cn应用抑制性消减杂交技术从枳中筛选根特异表达基因姚利晓，何永睿，许兰珍，雷天刚，彭爱红，邹修平，陈善春*（中国农业科学院柑桔研究所，国家柑桔工程技术中心，国家柑桔品种改良中心，重庆400712）摘要：为筛选分离植物根组织特异表达基因，以枳根RNA为试验组，叶RNA为驱动组，构建了枳根消减文库。从该消减文库中共获得有效序列1177个，其片段长度主要分布在200~500bp；序列拼接后得到455个非重复序列，其中245个与已知基因匹配，具有结合功能、催化活性和转运活性等生物学功能

3、，可参与植物的代谢、细胞生长、个体发育、应激反应等生物学过程。实时定量PCR检测结果显示这些基因中的主要乳液蛋白、早期结瘤素样蛋白和贝壳杉烯酸氧化酶等基因在根中高表达。关键词：枳；根特异表达基因；抑制性消减杂交技术；定量PCR中图分类号：S666文献标志码：A文章编号：0513-353X（2014）12-2481-08IdentificationofRoot-specificGeneswithSubtractiveSuppressionHybridizationfromPoncirustrifoliateYAOLi-xiao，HEYong-rui，XUL

4、an-zhen，LEITian-gang，PENGAi-hong，ZOUXiu-ping，andCHENShan-chun*（CitrusResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences；NationalCitrusEngineeringResearchCenter；NationalCitrusImprovementCenter，Chongqing400712，China）Abstract：Asuppressionsubtractivehybridization（SSH）libraryofPon

5、cirustrifoliatawassuccessfullyconstructedforscreeningthecitrusroot-specificgenesbyusingtherootRNAasDriverandtheleafoneasTester.Of1362sequencedclones，1177ESTs（expressedsequencetags）ingoodqualitywereacquiredfromtheSSHlibraryandassembledinto455Unigenes.Amongthem，245Unigeneswerehomol

6、ogouswiththegenesinGenBankdatabase，whichhavebiologyfunctionsuchascatalyticactivity，transporteractivity，carrieractivityandsoon.Theyplaytheimportantrolesinbiologyprocesssuchasmetabolicprocess，cellularprocess，developmentalprocess，responsetostimulusandsoon.The17geneswerefurtheranalyz

7、edbyreal-timePCRandconfirmedthattheywerehighlyexpressedintheroots，butverylowintheleaves.Bioinformaticanalysisindicatedthattheyarethemajorlatexproteingene，theearlynodulin-likeproteingene，theent-kaurenoicacidoxidasegeneandetc.Keywords：Poncirustrifoliata；root-specificgene；thesuppres

8、sionsubtractivehybridizationlibrary；quan