供体神经雷公藤预处理对异体移植后神经再生的影响

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1、供体神经雷公藤预处理对异体移植后神经再生的影响　　2.4再生轴突图像分析　　移植神经中段组织HE染色光镜照片(400倍)，经图像分析系统分析发现，再生有髓神经纤维数目、轴突直径和髓鞘厚度，A、B、E组与C组比较有统计学意义(q=3.19～4.76，3.37～4.11，2.95～3.91;P<0.05)，与D组比较同样有统计学意义(q=3.12～4.29，3.06～4.42，3.28～4.06;P<0.05)，而A、B、E3组间无差异(q=0.95～1.30，0.72～1.51，0.84～1

2、.34;P>0.05)，结果见表2。表2术后12周再生神经纤维图像分析组别神经纤维数.L.编辑。　　2.5电镜观察　　移植术后12周，A、B、C、E组再生神经纤维中，可见较多有髓神经纤维和少量无髓神经纤维，髓鞘发育良好，呈同心圆排列，轴浆内微丝、微管和线粒体等细胞器丰富;D组再生神经纤维中，有髓神经纤维较少，而无髓神经纤维较多，神经纤维间可见增生的结缔组织(图3、4)。　　2.6靶肌肉运动终板　　光镜下正常运动终板AchE阳性区呈棕红色或深棕色的“梅花形”或“卵圆形”，直径25～30μm，结构清

3、楚、边缘光滑，着色深。神经移植后16周，A、B、C、E组的终板接近正常，外形较大且规则，数量较多，呈深棕褐色(尤其C组最好);而D组终板形状较小且数量少，着色较浅(图5、6)。　　图1术后2周B组移植段神经组织学变化HE×400图2术后2周D组移植段神经组织学变化HE×400图3术后12周B组再生神经超微结构(箭头所示有髓神经纤维)图4术后12周D组再生神经超微结构TEM×10000(箭头所示有髓神经纤维)TEM×10000图5术后16周B组运动终板(箭头所示AchE阳性区)KarnovskyRoo

4、ts法×400图6术后16周D组运动终板(箭头所示AchE阳性区)KarnovskyRoots法×400　　3讨论　　异体神经移植的主要问题是排斥反应，MHC是移植免疫病理的核心，其中MHC-II是APC呈递抗原的关键分子，然而周围神经组织的雪旺氏细胞(SCs)、神经外膜和束膜细胞、血管内皮细胞等都能表达MHC-II分子。为了克服异体神经移植后宿主的排斥反应，除术后对宿主进行免疫抑制治疗外，人们探索用不同方法(物理或化学法)对供体神经进行预处理，灭活或清除神经组织细胞成分，以降低异体神经的免疫原性，

5、而引导轴突再生并起支架作用，具有三维空间结构的基膜管保持不变[6～8]。然而，SCs是周围神经的主要结构与功能细胞，在轴突再生与髓鞘形成、神经营养因子(NTFs)和黏附分子以及细胞外基质的合成与分泌均极为重要，灭活、清除SCs势必会影响轴突再生，而在去细胞异体神经移植物内种植SCs后则促进神经再生[9]。　　在本实验中，雷公藤多甙(B、C组)/MEM(D、E组)预处理的大鼠坐骨神经异体移植后服用不同剂量的雷公藤多甙，术后2周D组的炎性细胞入侵明显要比其它组严重，而移植后12周电生理和组织学检测、16周

6、靶肌肉运动终板染色，均显示D组要比其它组差，C组最好，A、B、E组差别不明显。其原因可能是：(1)雷公藤多甙预处理后，降低了供体坐骨神经的免疫原性，而神经组织结构未受影响，异体移植后免疫反应减轻，有利于少量入侵的炎症细胞产生促进SCs增殖分化的细胞因子，而SCs增殖并形成Bungner带是新生轴突得以延长进入移植段神经、并最终能到达靶器官的前提。而MEM预处理神经组织免疫原性未发生改变，因而异体移植后D组与A、B、C组相比，出现大量单核细胞、淋巴细胞入侵移植物，入侵的炎症细胞将SCs作为抗原清除，破坏

7、移植物的组织结构，神经基膜管塌陷，成纤维细胞增殖，纤维结缔组织增生，影响了再生轴突通过。而雷公藤能抑制成纤维细胞增殖和胶原纤维的合成[10]，故E组在D组基础上，增加术后雷公藤多甙剂量，其效果则明显好于D组，与A、B、C组相似，神经再生情况良好，未见明显结缔组织增生;(2)预处理后SCs仍具生物活性[11]，功能正常的SCs能分泌多种NTFs与黏附分子，且具有神经趋化性，能引导轴突生长锥生长[12]。移植物上具生物活性的SCs继续发挥促进轴突再生的作用，但是D组在预处理后未改变移植神经的免疫原性，术后

8、免疫抑制剂用量偏低，SCs被排斥而影响了神经再生;(3)供体神经组织所吸收的预处理溶液中的药物成分，在异体移植后的一定时间内发挥了免疫抑制作用，从而降低术后免疫抑制剂用量。　　供体神经雷公藤多甙预处理与受体服用免疫抑制剂，可能有协同作用，异体移植后能促进神经再生并降低术后免疫抑制剂用量，这对临床减轻或避免全身大剂量免疫抑制剂所引起的毒副作用有重要意义。当然，预处理溶液中雷公藤多甙最佳浓度与处理时间，这种方法对供体神经免疫原性具体影响、对生物体安全性的影响