bcl2和bad蛋白表达与皮肤血管瘤的相关性研究

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1、Bcl2和bad蛋白表达与皮肤血管瘤的相关性研究【摘要】目的：探讨bcl2和bad基因在血管瘤组织中的表达及相关性。方法：采用免疫组织化学方法检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中bcl2和bad基因的表达水平。结果：Bcl2在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞（P＜0.01）；Bcl2在退化期血管瘤内皮细胞的表达与正常皮肤组织血管内皮细胞相比，差异无显著性（P＞0.05）。bad在退化期血管瘤内皮细胞的表达明显高于增生期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞（P＜0.01）。结论：bcl2和bad参与了血管瘤的发生、发展和

2、退化；Bcl2通过抑制内皮细胞凋亡而促进血管瘤的增生；bad通过诱导血管瘤内皮细胞的凋亡而促进血管瘤由增生向退化的转变。【关键词】bcl2；bad；血管瘤；凋亡；免疫组织化学　　皮肤血管瘤是好发于婴幼儿的一种常见良性肿瘤。内皮细胞过度增殖和血管迅速生长是血管瘤病理组织学的最大特点，也是血管瘤发生的实质。根据内皮细胞生长、摄取3H胸苷、肥大细胞计数、纤维细胞形成以及脂肪浸润等将血管瘤分为：增生期、退化期和退化完成期三个时期，但至今其病理演变的确切机制仍不十分清楚。近年来研究表明血管瘤是一种血管过度形成的良性肿瘤，血管内皮细胞的过度增殖和血管形成在血管瘤病理演变过程中起着很重要的作用，而关

3、于影响血管内皮细胞的过度增殖和血管形成因素的研究越来越引起科研工作者的重视。细胞凋亡（apoptosis）是多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定由基因调控的细胞主动死亡过程。血管瘤自发消退的过程中无炎症反应，无组织坏死，非常符合凋亡的过程，因此许多研究者推测可能是由于增殖的血管内皮细胞凋亡导致血管瘤自发消退。Bcl2和bad是在调控细胞凋亡过程中的比较重要的蛋白质，它们在许多恶性肿瘤中的研究比较多，而在血管瘤这种良性肿瘤中的研究，尤其是在血管瘤不同时期表达的研究，国内外尚未见报道。本课题采用免疫组织化学方法、图像分析技术检测了Bcl2和bad在血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤血管中

4、的表达，以探讨Bcl2和bad在血管瘤由增生向退化转变过程中的作用机制。　　1材料和方法　　11材料　　111材料来源收集武汉大学人民医院病理科2002~2006年皮肤血管瘤存档蜡块50例，其中男性25例，女性25例。血管瘤所在的部位主要有头皮、前额、眼睑、耳背、颈部、背部、上臂、大腿、手和足的皮肤等。患者术前均未做任何辅助性治疗。　　112材料分组蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色和免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原（proliferatingcellnuclearantigen，PA），按Mulliken分类标准并结合PA

5、的表达进行分组：增生期血管瘤22例，退化期血管瘤28例，另取瘤组织周围正常皮肤组织5例作对照。　　12主要试剂和仪器　　121主要试剂即用型鼠抗人PA单克隆抗体（北京中山生物技术有限公司）；即用型兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体（北京中山生物技术有限公司）；浓缩型鼠抗人bad单克隆抗体（美国SantaCruz公司）；浓缩型鼠抗人Bcl2单克隆抗体（美国SantaCruz公司）；超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒（福州迈新生物有限公司）；DAB显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。　　122主要仪器Y，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；②3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑

6、制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③bad、Bcl2采用微波抗原修复（3档，10min），PA采用高压抗原修复，Ⅷ因子相关抗原采用胃酶消化修复抗原，PBS洗4×5min；④正常羊血清37℃孵育10min以减少非特异性反应；⑤一抗（bad，1:150；Bcl2，1:50)37℃孵育1h，PBS洗4×5min；⑥生物素标记的二抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑦链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑧DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；⑨苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照，人扁桃体作为bad、Bcl

7、2的阳性对照，人正常皮肤表皮作为PA的阳性对照。　　14免疫组织化学结果判断Bcl2、Bcl2和Ⅷ因子相关抗原以胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，PA以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞核和胞浆内无棕黄色反应物。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对Bcl2和的bad表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野