ngal表达在正常与原位胰腺癌裸鼠的对比研究

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1、NGAL表达在正常与原位胰腺癌裸鼠的对比研宄王永成1刘焱森2邓汉东2（1广东惠州市惠州市河南岸医院516027;2广东惠州市第三人民医院516000）【摘要】目的探讨在裸鼠动物模型中胰腺癌NGAL表达情况。方法人MiaPaCa-2和Capan-2胰腺癌细胞株培养，裸藏皮下胰腺癌细胞注射成瘤后，将瘤块取出切碎后裸鼠胰腺原位移植建立裸鼠原位胰腺癌动物模型，于术后处死裸鼠,釆用大体标木观察和病理切片HE染色的方法观察模型中肿瘤大小、转移情况和胰腺癌神经侵袭的情况。结果NGAL的阳性表达率在胰腺癌和正常组织中比较，差异有统计学意义（P<0.05>;NGAL表达

2、与胰腺癌分化程度、病理类型、临床病理分型、淋巴结转移密切相关。结论NGAL可能在检测胰腺癌发生、进展、转移中具有一定作用。【关键词】胰腺癌鼠皮下种癌原位植癌原位诱癌模型动物【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）17-0087-02胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤，好发于中老年男性，多数患者发现时已发生转移，预后差。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL）?SLipocalin家族的成员之一，可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发牛.

3、发展特别是肿瘤的浸润转移等过程［1］。为便于更深入地研宄胰腺癌侵袭的发生、发展规律，建立有效的胰腺癌动物模型就显得越来越重要，现报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1主要试剂人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2（M.D.Andson癌症中心馈赠）；Capan-2（中南医学院附属医院馈赠）;DMEM培养液（天津圣东生物科技公司）;胎牛血清（天津圣东生物科技公司）；胰蛋白酶（TRYPSIN生物制品公司）。1.1.2实验动物BALB/c-rw/nu雄性裸鼠20只购于北京维通利华实验动物技术冇限公司，鼠龄4周。在无菌室内层流架中饲养，恒温恒湿，垫料、饮水及饲料

4、均经火菌处理。1.2方法1.2.1细胞培养将MiaPaCa-2和Capan-2胰腺癌细胞株从液氮中取出，加入含10%胎牛血清和青霉素5万U,链霉素50mgDMEM培养液20mL,待培养液中细胞贴壁生长iL基本铺满瓶底，细胞状态良好时，加入0.25%胰酶消化液1〜2mL,显微镜下观察发现细胞胞质冋缩、细胞间隙增宽吋，加入含10%胎牛血清DMEM培养液终止消化。将细胞悬液加入含10%胎牛血清DMEM培养液重悬细胞，细胞培养期间定期于倒置显微镜下观察细胞形态。1.2.2建立裸鼠原位胰腺癌模型[2]1）裸鼠皮下成瘤：将培养瓶中的细胞用胰蛋白酶消化形成重悬细胞成

5、单细胞悬液备用。裸鼠分两组（正常对照组10只，胰腺癌组10只），对照组每天腹腔注射生理盐水0.2ml;胰腺癌组：接种人胰腺癌细胞株注射到己消毒的裸鼠双侧腹股沟皮下，待其成瘤。2）裸鼠胰腺原位种植：待皮下瘤块长至直径约lcm,处死裸鼠，取出皮下瘤块，无菌条件下剪切为约1mm3大小瘤块备用。将备用瘤块塞入包膜下。3）于术后处死裸鼠，将所冇裸鼠腹腔内肿瘤及临近脏器，肝脏、网膜、腹膜后组织一并取下，取肿瘤长宽高，按体积V=4/3×π×rl×r2×r3计算肿瘤体积，留取部分瘤块-80°C冻存备用，其余组织10

6、%甲醛固定，石蜡包埋，切片，光镜下观察其发生转移情况。1.2.3免疫组化测定用已知阳性结肠癌组织切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。染色结果判定:NGAL免疫阳性细胞为细胞浆和(或)细胞膜内表达棕黄色或棕褐色染色颗粒的细胞，在低倍镜(10×10)视野下选择阳性细胞密度最大的区域，然后在高倍镜(10×40>下选取5个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，计数500个肿瘤细胞中染色阳性细胞数。1.3结果判定采用IP(intensity+percentages)评分方法［3］，综合考虑染色强度和阳性细胞数，由两位病理学专家独立阅

7、片，再讨论确定免疫组织化学结果。①染色强度计分，细胞浆无染色:0分;淡黄色分;棕黄色:2分;棕褐色3分。②阳性细胞数计分。细胞浆无染色:0分;染色细胞数<1%:1分;染色细胞数1%〜10%:2分;染色细胞数10%〜33%:3分;染色细胞数33%〜66%:4分;染色细胞数〉66%:5分。两项之和即为总分。阴性(-):<2分;阳性(+)〜(+++):2〜8分;低表达(+):2〜4分沖等表达(++):5〜6分;高表达(+++):7〜8分。1.4统计学处理所有数据均采用SPSS11.0统计软件处理，各组间率的比较采用χ2检验，以α=0.05

8、为显著性检验水准。2结果2.1NGAL在不同组织中的阳性表达NGAL免疫反应表现为棕黄色颗粒，