墨旱莲乙酸乙酯总提物对t淋巴细胞功能的调节论文

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1、墨旱莲乙酸乙酯总提物对T淋巴细胞功能的调节论文.freelphocytes;hypersensitivitydelayed;lympho-cytetransformation;lymphocytesubsets;immuni-ty，cellularAbstract:AIMToexploretheeffectofEthylacetateex-tractofEcliptaprostrataoncellularimmunityinmice.METHODSTheexperimentalimmunosupp

2、ressivemicemodelside.EAEEPalandmodelmicebygastro-gavagefor6daystoobservetheeffectofEAEEPonthepro-portionofTlymphocytesubsets.freelphocytepro-liferationactivatedbyConA.RESULTSEAEEPsignifi-cantlyinhibitedthecellularimmunityinnormalmice（ThepropotionofCD4

3、+Tcells40.13%to30.87%.），butitremarkablyenhancedthecellularimmunityinimmunosuppressivemice（ThepropotionofCD4+Tcells34.87%to40.80%.）.CONCLUSIONEAEEPhasimmunomodulatoryeffectonTlymphocyte.0引言中药墨旱莲为菊科鳢肠属植物鳢肠（Ecliptaprostrata）的干燥地上部分，具有滋肝补血、凉血止血之功能［1］.近年药理

4、实验表明，墨旱莲水煎剂有较强免疫调节作用［2-4］，为进一步探讨其作用机制及寻找其有效成分，我们采用正常及免疫功能低下小鼠模型，观察墨旱莲乙酸乙酯总提物（ethylacetateex-tractofEcliptaprostrata，EAEEP）对T淋巴细胞介导的细胞免疫功能的影响.1材料和方法1.1材料健康昆明种小鼠，雄性，18～22g，二级动物，本校实验动物中心提供.EAEEP由西京医院植化室汤海峰、赵越平药师提供.（1g相当于原生药120g.主要成分为皂甙类物质）研为细末，过200目筛，用时以

5、蒸馏水配制成适宜浓度.小牛血清，杭州四季青生物工程材料研究所生产.批号:9905.ConA，Sigma产品，华美生物工程公司分装，25mg/瓶，批号:9802.MTT，Amresco产品，华美生物工程公司分装，500mg/瓶，批号:9909.伊红-Y，Sigma产品，华美生物工程公司分装，10g/瓶，批号:9712.环磷酰胺（Cy），200mg/瓶，上海华联制药有限公司，批号:990406.用前以NS稀释至3g.L-1.小鼠T细胞mAb及荧光抗体:抗小鼠CD4，CD8mAb为大鼠抗小鼠IgG（Co

6、ulter-Immunotech，China），FITC标记的兔抗大鼠IgG（武汉博士德公司）NU-4500ECO2孵箱，美国Nuaire公司.OlympusCH电子显微镜，OlympusOpticalCo.Ld.TT法测定T淋巴细胞增殖末次给EAEEP后24h，小鼠全身用750mLL-1乙醇消毒，无菌下取脾，放入盛有适量Hanks液的平面皿中，用不锈钢筛网轻轻将脾研碎，制成单个细胞悬液.将细胞悬液移入带盖的无菌试管中，用Hanks液洗3次，每次离心10min.将洗过3次的细胞悬液悬浮于2mL的完

7、全培养液中，用伊红-Y染色计数活细胞，将细胞数调成2×1011L-1.每份细胞悬液分2孔加入24孔培养板中1mL孔-1，其中一孔加ConA液50μL，另一孔不加ConA作为对照.培养结束前4h，每孔弃去培养液0.7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640培养液0.7mL，同时加入MTT（5gL-1）50μL孔-1，温箱中继续培养4h.培养结束后每孔加入1mL异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，570nm测吸光度.统计学处理:采用Excel软件进行t检验.2结果2.1EAEEP对小鼠外周血T细胞亚

8、群的影响与NS比较，EAEEP的大、小剂量及Cy均显著降低小鼠CD4+T细胞亚群的数目，而对于CD8+T细胞亚群的数目，因所用EAEEP的剂量呈现不同的作用，大剂量的EAEEP能显著提高CD8+T细胞亚群的数目，小剂量的EAEEP可显著降低CD8+T细胞亚群的数目.Cy则对CD8+T细胞亚群无明显影响.与Cy组比较，EAEEP两个剂量均能显著提高Cy所致的CD4+T细胞亚群数目的下降（Tab1）.表1EAEEP对小鼠外周血CD4（略）2.2EAEEP对小鼠DTH的影响与NS组比较，