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时间:2018-11-17
《哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达论文蔡绍曦,赵海金,丁彦青,李文军,周斌,肖军【关键词】抑制性消减杂交技术;哮喘;嗜酸细胞;细胞支架蛋白质类Differentiallyexpressionofgenesassociatedodelingofperipheralbloodeosinophilsduringasthmaticattack【Abstract】AIM:Todeterminethedifferentiallyexpressedgenesassociatedodelingofperiphera
2、lbloodeosinophils(EOS)inpatientsduringasthmaticattack.METHODS:DoublestrandedcDNAplifiedfromtotalRNAofEOSatthetimeofasthmaticattackandafterimprovementrespectivelybySuperSMARTcDNASynthesistechology,Suppressionsubtractivehybridization(SSH)andPCRselectdiffere
3、ntialscreeningtechnologyologyanalysisologyanalysisidentified6differentiallyexpressedgenesassociatedodeling,includingslingshot2L(SSH2L),PP1catalyticsubunit,betaisoform(PP1Cβ),dedicatorofcytokinesis8(DOCK8),Homosapiensproteintyrosinephosphatasenonreceptorty
4、pe6and12(PTPN6,PTPN12),myosinregulatorylightchaininteractingprotein(MIR).CONCLUSION:Thedifferentiallyexpressedgenesassociatedodelingmayparticipateinexacerbationofasthma.Furtherstudyonthegenesfunctionmayprovideneatreatment.【Keya;eosinophils;cytoskeletalpro
5、teins【摘要】目的:研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法:应用SuperSMARTcDNAsynthesis技术从总RNA合成足量的双链cDNA.经液相杂交消减两组共同序列,以抑制性PCR方式扩增差异表达序列.构建上调与下调cDNA文库,菌落PCR扩增差异片段.freeleinonesecond,FEV1)及气道反应性相关,尤其在持续性及重症哮喘,外周血EOS增多与持续性气流阻塞显著、独立相关[1-2].细胞骨架重建在细胞黏附,伸展,运动及细胞内众多信号转导调
6、控等过程中发挥重要作用[3].哮喘患者外周血EOS已经被激活或活化,但其真正分子机制远未清楚,因此我们利用SSH技术研究哮喘患者在发作与缓解时外周血EOS与细胞骨架重建相关基因差异表达,探索其调控分子本质,为哮喘诊治提供帮助.1材料和方法1.1材料分离哮喘患者外周血EOS的Percoll试剂购自瑞典AmershamPharmacia公司;Trizol总RNA分离试剂购自美国Invitrogen公司;SuperSMARTcDNAsynthesis试剂盒及Chromaspin1000depc水纯化柱购自美国C
7、lontech公司.DIG标记和检测试剂为Roche公司DIGHighPrimeDNALabelingandDetectionStarterKitI;构建文库的cDNA来自哮喘患者治疗前与缓解时外周血EOS总RNA经SuperSMARTcDNAsynthesis技术合成[4].1.2方法1.2.1抑制性消减杂交以治疗前后EOScDNA互为检测子(Tester)和驱动子(Driver).取纯化Tester及Driver的双链cDNA各2μg,分别用限制性内切酶RsaⅠ37℃酶切1.5h,酶切完全后鉴定酶切效
8、率.SSH其他过程按照SSH试剂盒说明及
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