肝功能异常患者血清中自身抗体检测及意义论文

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1、肝功能异常患者血清中自身抗体检测及意义论文.freelL，分离血清，以ELISA法做病毒性肝炎血清标志物检测，同时以间接免疫荧光法检测血清中的相关自身抗体，包括ANA、SMA、LKMI及AMA。试剂来源为德国欧蒙免疫试剂公司生产的自身抗体试剂盒。血清检测时主要采用Hep2细胞、猴肝、鼠肝、鼠肾、心肌和胃组织冰冻切片作为抗原，采用生物薄片马赛克技术将带有组织细胞的6种切片组成一个反应区，4℃保存备用。将待检血清1∶100稀释后与组织细胞孵育30min，后加入荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合30min，

2、经洗片、封片后荧光显微镜观察结果；ELISA法检测全部血清病毒性肝炎标志物，包括抗HAVIgM、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb及抗HCV抗体和抗HEVIgM/IgG等，其中抗HAVIgM试剂盒购于上海华泰生物工程实业有限公司，HBV试剂盒购于上海荣盛生物技术有限公司，抗HCV抗体和抗HEVIgM/IgG购自洛阳华美生物工程有限公司。1.3结果判定在同一张切片中根据荧光模式特点可同时判定出下列几项自身抗体：ANA、AMA、SMA、LKM和抗心肌抗体（ASA）。血清稀释度A

3、NA1∶1000、SMA1∶320、AMA及LKM1∶100时组织细胞内出现特异性绿色荧光判为阳性，未见荧光反应者为阴性。1.4统计学方法计数资料用χ2检验。2结果2.1自身抗体的阳性检出率80例患者中，9例（11.25%）出现1项或1项自身抗体阳性：ANA（+）且AMA（+）3例、单纯AMA（+）1例、ANA（+）且SMA（+）2例、单纯SMA（+）3例，明显高于对照组的检出率（ANA7.5%，AMA5%，SMA6.25%，P0.05）；未检出LKM。2.2性别与自身抗体检出率的关系见表1。表1

4、性别与自身抗体检出的关系（略）Tab1Therelationshipbetarkersofviralhepatitisχ2=5.39，P0.05.3讨论尽管自身抗体在自身免疫性肝炎发病机制中的确切作用尚未得以证实，但其在诊断疾病、了解病程和观察疗效中有很重要的价值。目前，已经发现与自身免疫性肝炎有关的自身抗体包括ANA、SMA、抗骨架蛋白抗体、抗肌蛋白抗体、LKM和AMA等，其中常用的有ANA、SMA、LKM、AMA和可溶性肝抗原抗体等。依据这些抗体，不仅可以实现对自身免疫性肝炎的诊断，还可对其进

5、行分型3。本实验试剂盒提供的各项抗体的阳性判断标准为1∶100，并将其定为血清稀释的起点，但这个标准不是针对自身免疫性肝病的。本实验室将实验结果与临床资料做长期比对，认为ANA1∶1000，SMA1∶320，AMA及LKM1∶100作为阳性的判断标准是比较恰当的，适合于自身免疫性肝病的诊断需要。依据这个标准，检测结果显示自身抗体总阳性率为11.25%，其中ANA7.5%、AMA5%、SMA6.25%，说明自身免疫性抗体是导致肝功能异常的一个重要因素。因此，应该重视肝功能异常患者肝病相关自身抗体的检

6、测。笔者资料中，自身抗体的检出率有明显的性别倾向，女性高于男性，符合自身免疫性疾病多见于女性的特点。自身免疫性肝炎的发病机制有别于病毒性肝炎，二者的治疗方案也截然不同，前者以免疫抑制疗法为主，后者则采用抗病毒治疗。有文献报道，血清中HCV及HDV抗体阳性的患者可产生自身抗体4，笔者的实验也表明，肝炎病毒标志物阳性的患者，其自身抗体阳性率远低于阴性者。因此，对于病毒性肝炎标志物和自身抗体同时阳性的患者需谨慎确定治疗方案。生物马赛克技术可将多种组织细胞抗原基质集中在一张玻片上，一次反应检测多种抗体，具

7、有省时、方便的优点，适合于临床实验室应用；但是如何排除非特异因素的干扰，准确识别抗体特异的荧光模式是保证实验结果可靠的重要因素，实验室应加强这方面的训练及标准化工作以保证实验结果的可靠。