无泵驱动体外膜肺治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原mrna的表达论文

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1、无泵驱动体外膜肺治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原mRNA的表达论文【摘要】目的:观察双侧股动脉股静脉无泵驱动体外膜肺（bAVECMO）治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原和内皮素1（ET1）的表达.方法:10只犬在建立急性呼吸衰竭模型情况下给予bAVECMO治疗.分别于模型建立完成时、转流开始后1，2，3，4h取肺组织.应用放免及RTPCR技术,观测bAVECMO期间肺组织匀浆ET1变化、肺组织ppET1mRNA的转录表达变化.结果：犬ARDS模型肺组织匀浆ET1含量转流2h达到高值，之后缓慢下降.方差分析表明肺

2、组织匀浆ET1的均数在转流前后差异有统计学意义.肺组织匀浆ET1转流3h与4h差异无统计学意义.RTPCR对ppET1mRNA的结果与肺组织匀浆ET1放免结果相一致.结论：对于急性呼吸衰竭bAVECMO的早期治疗有积极意义.【关键词】急性呼吸衰竭内皮素1动脉静脉无泵驱动体外膜肺氧合0引言近年来研究发现急性呼吸衰竭(ARF)和急性呼吸窘迫综合症(ARDS)时内皮素1mRNA表达显著增强，说明ET1参与了急性肺损伤的病理生理过程.在对ARF、ARDS的治疗中无泵驱动体外膜肺辅助(AV)转流技术(AVECMO)由于其有效并对血

3、液有形成份破坏轻等优点，已被应用于临床［1］.在应用AVECMO转流中，国外均采用单侧股动脉股静脉ECMO转流.freelRNA，ET1的变化，为临床提供参考依据.1材料和方法1.1材料选择健康成年家犬10只，雌雄不限，体质量18~35（23.4±4.7)kg,用35g/L苯巴比妥100mg/kg腹腔注射麻醉，待犬意识不清时，气管插管与麻醉机连接.常规消毒铺巾，分别解剖犬左、右两侧的股动脉及股静脉，全身肝素化，用量为1mg/kg，股动脉，股静脉上、下两端分别套丝线，结扎下端的股动脉、股静脉.阻断股动脉、股静脉上端，再阻断与结扎血管的中下

4、端，切开血管.根据动、静脉内径的大小选择不同型号的PVC动、静脉插管，插管后结扎固定以防止脱出，常规缝合皮下、皮肤，防止伤口渗血.将动、静脉插管与bAVECMO装置连接.右侧胸部开胸沿着第4肋间进胸，切开心包分别将心包固定在切口边缘，主动脉根部置入测压针管及测压装置，将此装置与飞利浦有创血压、心率动态监护仪连接.当bAVECMO转流时，通过bAVECMO端口应用1000mL/L氧气，其用量为(1.2±0.4)L/min.建立循环后，根据不同的转流时间收集标本.①在体外循环开始前，经胸部切口取右肺下叶少许组织（10mm×10mm），置液氮

5、罐待检测.②制作呼吸衰竭动物模型进行试验.应用潘克罗宁（Pancuronrum，0.1～0.2mg/kg），首次剂量为4mg，以后每30min左右追加2mg使呼吸完全消失.通过麻醉机调节呼吸频率和潮气量（犬在安静状态下潮气量如体质量在16.4～30.5kg，潮气量多在251～432mL）.采用血气分析仪测定犬动脉血pH值、动脉血氧分压、动脉血氧饱和度及动脉血二氧化碳分压值，当达到呼吸衰竭指标时，经右心房抽血10mL于注射器内，立即密封置冰盒待检.另经胸部切口取右肺下叶少许组织（10mm×10mm），置冰盒后待检测.开始bAVECMO转流实验

6、后1,2,3,4h，分别经右心房抽血10mL、胸部切口取右肺下叶少许组织（10mm×10mm），置液氮罐待检测.1.2方法1.2.1肺组织匀浆ET1含量测定采用SN695型全自动γ计数器(上海原子核所，放射免疫药盒购自解放军总医院科技开发中心放免所),以放射免疫法测定标本ET1含量.1.2.2肺组织ppET1检测采用RTPCR法，步骤如下：采用Trizol一步法提取研磨肺组织总RNA并测定其浓度和纯度.从GenBank内皮素1前体原(preproET1)的基因序列（NM001002956）,使用PPrimer5.0软件分析设计引物

7、（TaKaRa公司合成）.preproET1的一对引物为：sense:5′ATGGACCACTTGGAAAGCAG3′;antisense:5′GGCACCTGAGTGAGACACAA3′，PCR产物长度135bp.以βactin为内参照:sense:5′CCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGAC3′;antisense:5′AGGGTACATGGTGGTGCCGCCAGAC3′，PCR产物长度：587bp.RTPCR条件：采用TaKaRa公司OneStepRNAPCRKit（AMV）试剂盒.每个反应加总RN

8、A0.75μg，上、下游引物各20pmol，逆转录酶、Taq酶、RNasin、dNTP及Buffer均按照试剂说明加样.50℃逆转录30min，94℃变性2min,