塞来昔布对高表达her

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1、塞来昔布对高表达Her【摘要】目的探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞SKBr3的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法4种不同浓度的塞来昔布处理乳腺癌细胞系SKBr3细胞24、48h，MTT法测定24、48h后SKBr3细胞的增殖活性，流式细胞仪(FCM)检测48h后各浓度塞来昔布诱导细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。结果与对照组相比，塞来昔布以时间、剂量依赖性方式抑制SKBr3细胞增殖(P<0.05)。作用48h后，塞来昔布诱导SKBr3细胞凋亡并阻断了细胞周期进展，凋亡率随塞来昔布浓度的增加而增加(P&l

2、t;0.05)，且随着药物浓度的增加，G0/G1期细胞比例逐渐增加、S期及G2/M期细胞比例逐渐下降(P﹤0.05)。结论塞来昔布抑制高表达Her-2/neu的SKBr3细胞的增殖，诱导其凋亡。【关键词】塞来昔布;乳腺癌;SKBr3细胞;增殖;凋亡　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheantitumoreffectsofcelecoxib-acyclooxysenase-2(COX-2)inhibitoroninhibitingproliferationandinducingapoptosis

3、ofHer2/neu-overexpressinghumanbreastcancercelllineSKBr3.MethodsHumanbreastcancercelllineSKBr3cellsinedatthetepointsbyMTTassayandtheeffectof4concentrationsofcelecoxibonapoptosisinductionandcellcycleofSKBr3cellsetry.Resultsparede-dependentmanner(P<0.05).48haftertre

4、atment,celecoxibinducedtheapoptosisofthecellsandblockedtheprogressofSKBr3cellcycle;ol/L的塞来昔布，继续培养24、48h，根据不同实验要求收集细胞。设立对照组，即培养液中仅加细胞，不加药物。　　1.4实验方法　　1.4.1细胞形态观察在培养皿中放入载玻片培养细胞，加入药物后继续培养24h，取出载玻片在倒置显微镜下观察细胞形态学变化并摄片。　　1.4.2MTT法检测细胞增殖抑制情况对数生长期的SKBr3细胞以1×105/ml的密度接种于96孔培

5、养板，每孔200μl。贴壁24h后换液，设4个实验组，加入塞来昔布使其终浓度分别为15、30、60、120μmol/L，每一浓度、每个时间点均设3个复孔，继续培养24、48h。对照组细胞不加塞来昔布。实验终止前4h各孔加入MTT(5mg/L)20μl，继续培养4h后弃上清，每孔加入DMSO150μl，震荡10min待结晶溶解后，在酶标仪570nm波长处测定各孔光密度(D)值，按下列公式计算细胞增殖抑制率：抑制率(%)=(1-实验组D平均值/对照组D平均值)×100%。　　1.4.3流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率及周期分布收

6、集对照组及不同浓度塞来昔布(30、60、120μmol/L)处理48h后的SKBr3细胞，用4℃预冷的70%乙醇固定12h，离心后弃固定液，PBS重悬5min后400目筛网过滤，加入PI染色液，4℃避光染色30min，上FCM测试凋亡率及分析细胞周期。激发波长为488nm。　　1.5统计学处理用SPSS11.5统计软件进行数据处理，数据以±s表示。P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1形态学观察对照组：细胞扁平，生长旺盛，呈梭形、多角形贴壁生长，形态饱满，境界清晰，核膜、核仁轮廓明显，细胞间结构紧密。塞来昔

7、布60μmol/L处理细胞24h后细胞呈现凋亡的形态学变化：可见大量细胞变圆，体积变小，结构变松散，部分细胞表面发芽，细胞形状不规则，部分脱落漂浮，少数细胞体积增大、破裂，呈坏死状;胞浆致密，染色质固缩、集聚至周边呈月牙形斑块;细胞周围碎片增多(图1、2)。　　图1对照组细胞形态(×200)　　图2塞来昔布60μmol/L处理24h细胞形态(×200)　　2.2塞来昔布对SKBr3细胞生长的抑制作用不同浓度塞来昔布作用于SKBr3细胞24、48h后，MTT法测定结果显示：塞来昔布显著抑制SKBr3细胞的增殖，且呈时间、剂量依赖

8、性(P﹤0.05)，即随着塞来昔布作用时间和作用浓度的增加而抑制作用增强(表1)。表1塞来昔布对SKBr3细胞的抑制率比较：P﹤0.05;24h和48h组间比较及组内各浓度间比较：P﹤0.05　　2.3塞来昔布对SKBr3细胞凋亡的影响FCM检测结果显示：SKBr3细胞经各浓