山东玫瑰花的过氧化物酶同工酶分析论文

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2、esis；Varietyidentification玫瑰花是蔷薇科植物玫瑰RosarugosaThumb.的干燥花蕾［1］.freelin离心15min，取其上清液，加入等体积蔗糖溶液，混匀，存于冰箱内备用。整个制备过程中保持样品温度不超过4℃。表1药物材料（略）2.2电泳槽的安装垂直板电泳槽的式样很多，目前流行的是用有机玻璃做的由两个半槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子，模子的两侧形成正负两个槽，供装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入一个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡，然后用水

3、冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，直立干燥，禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边，将两块玻璃板装入夹套内，然后垂直地放入半槽之间，长螺杆固定。上螺丝时，要按顺序逐步拧紧，均匀用力。电泳槽装好后，将琼脂熔化，趁热注入正极槽的小池内，使在凝胶模子的下部凝结成约5mm厚的琼脂层。2.3分离胶与浓缩胶的制备将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按1∶2∶1∶4的比例（V/V）混合，配成分离胶液16ml；将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按1∶2∶1∶4的比例（V/V）混合，配成浓缩胶液4ml。将配好的两种胶液及

4、20～50ml新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气20min。分离胶液中加入四甲基乙二胺30μl，混匀，立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中，注意防止气泡。分离胶液上覆盖约3mm后的蒸馏水，静置1h以上，待分离胶与水层间界面清晰时，用滤纸条小心吸净水层。插上样品槽模板，使其底部距分离胶上层约1cm。向浓缩胶液中加入四甲基乙二胺15μl，混匀后注入凝胶模子中，静置30min，浓缩胶变为乳白色，垂直向上小心取出样品槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约800ml，两槽内液面介于高低玻璃板之间。2.4点样用微量注射器吸取样品液20～40μl，注入样品

5、槽底部即可。2.5电泳将电泳槽正负极分别与电泳仪的正负极相连，在负极槽电极缓冲液中加溴酚蓝指示剂1～2滴，打开电源，开始电泳。电泳采用稳流控制，开始时电流15mA，当样品达到分离胶与浓缩胶界面时，增大电流至25mA。为子止温度过高，可将电泳槽放在冰箱内，当溴酚蓝前沿行至距琼脂层约1cm时，停止电泳，整个过程约需3h。2.6染色与保存打开电泳槽，取出胶板，标记前沿。将胶板浸于预先配好的显色液内，加几滴双氧水，5～10min后出现清晰的蓝色谱带。3结果3.1泳动率的计算作为示踪指示剂的溴酚蓝在不同浓度的凝胶中，迁移速度基本相同，且分子筛效

6、应小，近似于自由电泳，电泳过程中始终位于最前沿。按下列公式计算玫瑰花各样品的主要鉴别谱带泳动率。结果见表2。表2山东玫瑰花的过氧化同工酶的Rf值（略）泳动率（Rf）=谱带泳动距离示踪指示剂泳动距离3.2电泳图谱的测绘根据各样品谱带的泳动率和谱带形态及出现的先后顺序，绘制电泳图谱。结果见图1。4讨论电泳图谱显示，19个品种的玫瑰花过氧化物酶同工酶分析，其谱带从负极到正极，显现出谱带1～5条。其中16个品种具有D1带和D2带，品种间差异不明显，只有平阴四号、刺果、大红花3个品种缺少这两个谱带。结合形态学特征分析，平阴四号、刺果都具有蔓生的

7、特点，是玫瑰与蔷薇的杂交变种；大红花具有枝条直立、花托杯状、多次开花的月季特征，是玫瑰与月季间某一品种的杂交变种。所以，作者认为玫瑰花过氧化物酶同工酶谱带中D1带和D2带是玫瑰的基本谱带，而玫瑰与其他蔷薇类杂交所产生的品种大多不具有此特征的谱带。当然，在品种的进化过程中也有例外，如紫枝便具有D1带和D2带，可能与其在杂合过程中更多地遗传了玫瑰的特征，这有待于进一步探讨研究。根据所绘电泳图谱，可以将玫瑰花过氧化同工酶谱带分为两大类9个谱型。第1类为缺少D1带和D2带的，分为3种谱型：①Ⅰ型，具有D5带和D6带如平阴四号。②Ⅱ型，只有D6

8、带如刺果。③Ⅲ型，具有D3带、D4带和D6带如大红花。第2类为具有D1带和D2带的，分为6种谱型：①Ⅳ型，具有D6带的6个品种如平阴一号、平阴十一号、西胡一号、西胡二号、西胡三号、重瓣白。②Ⅴ型，具有D5带的4个品种如丰