hplc法测定盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊的有关物质论文

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1、HPLC法测定盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊的有关物质论文齐潇潇邓红林华庆张蜀余楚钦【摘要】目的测定盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊的有关物质。方法采用反相高效液相色谱法(RPHPLC法)，色谱柱为KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠9.77g，加水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调节pH值至3.10±0.05）（体积比20∶80）为流动相，检测波长为224nm，流速1.0mL·min-1。结果各杂质峰分离良好.freelate3000高效液相色谱仪，PDA

2、3000型检测器，CHROMELEONVersion工作站（美国戴安）；KQ100型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BS224S型万分之一电子天平；CP225D型十万分之一电子天平（Sartorius）；盐酸左旋沙丁胺醇原料（苏州君宁新药开发中心有限公司，质量分数99.8%）；盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊（自制，批号080721、080722、080723，规格：4mg/粒）；甲醇（色谱纯）；其他试剂均为分析纯。2方法与色谱条件2.1溶液配制取本品20粒，研细，精密称取细粉（约相当于盐酸左旋沙丁胺醇2

3、0mg），置20mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1mL于100mL量瓶中，加水稀释至刻度，即得对照品溶液。另取盐酸左旋沙丁胺醇原料药约20mg，精密称定，置20mL量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，即得原料药对照溶液。取盐酸左旋沙丁胺醇空白微丸，研细，按处方比例称取适量（约相当于左旋沙丁胺醇20mg），置20mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得阴性对照溶液。2.2色谱条件色谱柱：采用KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇磷酸盐缓冲液(取

4、磷酸二氢钠9.77g，加水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调节pH值至3.10±0.05）（体积比20∶80）；流速：1.0mL·min-1，检测波长：224nm。理论塔板数按盐酸左旋沙丁胺醇峰计算不低于3000。3结果3.1专属性试验［2-4］取供试品溶液、原料药对照溶液和阴性对照溶液各3mL，装入石英比色杯中，分别在254、365nm的紫外灯下，将石英比色杯斜放成45°，并距灯管5～6cm，照射10min，取出。另分别取约10mg盐酸左旋沙丁胺醇原料、空白、样品各3份，分别置10mL量瓶中，按以下条件

5、进行破坏：①加0.01mol·L-1盐酸3mL放置5min，然后加入0.01mol·L-1氢氧化钠3mL中和，再加水稀释至刻度；②加入0.01mol·L-1氢氧化钠3mL放置5min，然后加入0.01mol·L-1盐酸3mL中和，再加水稀释至刻度；③加入3％过氧化氢5mL放置10min，加水稀释至刻度。取适量的空白、原料、样品细粉各1份，直接平铺在表面皿上，于90℃下放置2h，取出，分别精密称取适量（约相当于左旋沙丁胺醇10mg）于10mL量瓶中，加水定容。以上经破坏的溶液用0.45μm的滤膜滤过,进样2

6、0μL，依法进行HPLC分析，与未经破坏的原料药对照溶液和供试品溶液进样所得的色谱图进行比较，结果显示：空白辅料稳定，对测定没有干扰；样品经紫外、酸、碱、氧化、高温破坏后检测发现杂质量有所增加，各降解产物分离程度良好，见图1。1.阴性对照；2.原料药对照；3.供试品；4.氧化破坏样品；5.酸破坏样品；6.紫外破坏样品；7.高温破坏样品；8.碱破坏样品;A-E.有关物质图1左旋沙丁胺醇缓释胶囊降解产物的HPLC图谱（略）Figure1HPLCofdegradationproductsoflevalbuter

7、olhydrochloridesustainereleasecapsules3.2检测限取有关物质供试品溶液，逐级稀释，当溶液质量浓度为0.7μg·mL-1时进样20μL，峰信号约为空白样品测出的噪音信号的3倍，故检测限为14ng。3.3供试品溶液的稳定性考察取有关物质供试品溶液20μL，分别于0、1、2、4、8h测定，记录峰面积分别为4.071、4.206、4.117、4.156、4.314，测得平均有关物质为0.80％，RSD＝1.76％，表明供试品溶液在8h内稳定。3.4样品测定取本品20粒（3批

8、），研细，按“2.1”项下的方法制得供试品溶液和对照品溶液。取对照品溶液20μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使左旋沙丁胺醇的峰高为满量程的20%～30%［5］；取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至35min，供试液的杂质峰的面积总和不大于有关物质对照溶液的主峰面积的1.5倍。测得3批样品有关物质的量分别为0.79％、0.79％和1.07％。4讨论4.1本法可检出5个分离度良好的有关物质，通过二级管阵列检测器进行