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1、人胎盘绒毛提取物体外对T细胞应答的抑制效应作者：肇静娴，曾耀英，江逊，季煜华，刘毅【关键词】胎盘绒毛；滋养层；免疫抑制；T淋巴细胞；色氨酸加氧酶【Abstract】AIM:Tohaveaprogressiveknoestersofpregnancy.METHODS:Tissueextractsearly(10iddle(20pactsonTcellactivationpactsonproliferationethodof淋巴细胞分离液购自挪威NyedPharmaAS公司；annhein公司；人Th1/Th2细胞因子流式微球检测（cytometricbea
2、darray,CBA）试剂盒以及抗人和抗小鼠CD3FITC,CD69PE,CD25PEmAb均购自美国BDPharMingen公司；兔抗IDO抗体购自美国CHEMICON公司；小鼠抗βactin抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG,HRP标记的兔抗小鼠IgG均购自美国SantaCruz公司；RPIM1640培养基，胎牛血清购自美国GIBCOBRL公司；BIORAD3550酶标仪，AmershamMiniVE垂直板电泳仪，FACSCalibur型流式细胞仪.1.2方法1.2.1胎盘绒毛提取物的制备绒毛组织取自人工流产（孕10in吸取上清，经0.
3、22μm滤膜过滤，分装，-20℃保存.检测蛋白浓度约为0.2g/L.1.2.2T细胞活化和增殖诱导及实验分组分离健康人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells,PBMC），或从小鼠淋巴结制备淋巴细胞，以含100mL/LFBS的RPMI1640完全培养液悬浮，细胞密度为1.5×109/L，96孔板培养，每孔定容200μL.设置不加刺激剂的空白对照组（control）和不加刺激剂但加入不同体积百分比（5%,10%,15%）绒毛提取物（孕10,20或37g/L，刺激小鼠T细胞活化和增殖用ConA5mg/L.1.2.3流式
4、细胞术分析T细胞活化人PBMC或小鼠淋巴细胞按方法1.2.2进行分组培养，6h后收集细胞，常规方法标记抗人或抗小鼠的CD3FITC,CD69PE抗体，培养24h后按相同方法标记CD3FITC,CD25PE抗体，流式细胞术分析CD69和CD25阳性T细胞百分率.1.2.4C按方法1.2.2进行分组培养，每孔定容100μL，各组设置5个复孔.培养48h后每孔加入10μLC,PBS离心洗涤1次，380μLPBS重悬，加入50mg/L的PI染液20μL混匀，5min后即用流式细胞仪进行检测.PI染色阳性细胞为死细胞.1.2.6流式微球法检测培养上清中的细胞因子健
5、康人PBMC按方法1.2.2进行分组培养，6h和24h分别收集培养上清，使用人Th1/Th2CBA试剂盒，按2结果2.1胎盘绒毛提取物对人T细胞活化的影响各期的绒毛提取物对静息态的人T细胞CD69和CD25分子表达（CD69+T细胞为7%左右，CD25+T细胞为9%左右）均无显著影响，但对PHA诱导的T细胞CD69和CD25表达均具有显著的抑制作用（P<0.01）.表1显示各组抑制率，抑制率按［(PHAControl)(PHA+%extractControl)/(PHAControl)］×100%计.2.2胎盘绒毛提取物对人T细胞增殖的影响鉴于15
6、%的绒毛提取物对T细胞活化的抑制作用过强，因此选取5%和10%这2个浓度研究其对T细胞增殖的影响.培养48h后，HCI类分子而减少母体免疫系统的攻击外，还具有一套能够主动抑制母体免疫攻击的“防御系统”.人胎盘绒毛提取物对小鼠T细胞活化的抑制作用提示，绒毛提取物中存在一些保守的、无种属特异性的免疫抑制因素，如高浓度的雌、孕激素对人和小鼠的T细胞活化、增殖均具有抑制作用［6］.IDO是细胞内一种催化色氨酸（Trp）沿犬尿氨酸途径降解的限速酶，体内、外研究都表明，IDO能够抑制T细胞增殖，是机体天然存在的免疫抑制机制［3，7］.一般认为，IDO抑制T细胞增殖的
7、原因是它降解Trp，造成缺乏Trp的微环境，这对一般细胞影响似不明显，而T细胞由于存在一个对Trp敏感的检查点，使细胞增殖停滞于G1期中期［8］.胎盘滋养层细胞产生的IDO能阻断针对胎儿组织表达的父本HLA等位基因产物的母体活化T细胞攻击，因而是防止母体T细胞排斥同种异基因胎儿的必要因素［4］.本研究结果显示，20ansB,ZorziellorA.Indoleamine2,3dioxygenaseandregulationofTcellimmunity［J］.BiochemBiophysResmun,2005,338(1):20-24.［4］HonigA
8、,RiegerL,KappM,etal.Indoleamine2,3dioxyg
