人参总皂甙协同造血生长因子体外诱导cd34+造血干-祖细胞扩增与分化的作用

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1、人参总皂甙协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞扩增与分化的作用作者：王建伟，王亚平，王莎莉，姜蓉【摘要】为探讨人参总皂甙（totalsaponinsofpanaxginseng,TSPG）协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞（HSC/HPC）扩增与分化的作用，收集人脐血、骨髓细胞并采用StemsepTM干细胞分选系统分离纯化CD34+HSC/HPC，用不同剂量TSPG加入不同组合的造血生长因子进行培养，检测细胞总数、CD34+细胞和CD33+细胞比例及集落形成细胞总数（CFC）、粒系祖细胞(CFU-GM)数量变化。结果显示：1

2、0-70μg/mlTSPG均可不同程度地提高脐血细胞总数、CFC数和CD34+细胞数，50μg/ml是最佳刺激浓度，可使细胞总数、CFC数和CD34+细胞数分别增至(2470.5±79.96)×103、(53.96±4.29)×100%和(21.86±3.09)×100%;20μg/ml是液体培养诱导骨髓CD34+细胞向粒系分化的最佳浓度，可使细胞总数、CFU-GM和CD33+细胞分别增至(133.2±9.03)×103、(26.78±1.91)×100%和(16.98±1.73)×100%；甲基纤维素半固体培养检测显示，TSPG（10-50μg/m

3、l）均能提高CD34+细胞形成CFU-GM的集落产率，以TSPG20μg/ml效果最为明显。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34+造血干/祖细胞体外扩增与定向诱导分化。【关键词】人参总皂甙；CD34+造血干/祖细胞；细胞扩增；细胞分化　　SynergisticEffectsofTotalSaponinsofPanaxGinsenginbinationatopoieticGroatopoieticgrocordbloodandbonemarrosandtheexpandedcellnumber,CD34+cellnumber,CD33+cellra

4、tio,thenumbersoftotalCFCandhematopoieticprogenitorcellnumberl)couldraisetheexpandedcellnumber,CD34+cellnumber,andthenumbersoftotalCFC,TSPG50μg/mlostpotentstimulatingconcentration,andincreasedtotalnucleatedcellsto(2470.5±79.96)×103、CFCto(53.96±4.286)×100%andCD34+cellsto(21.86±3.

5、094)×100%;TSPG(10-50μg/ml)couldraisethecolonyformationrateofCFU-GM,TSPG(20μg/ml)inducedthebesteffectongranulocytopoieticdifferentiationmittedofCD34+cells.ItisconcludedthattheoptimalconcentrationofTSPGcanpromoteCD34+cellstoproliferateanddifferentiatebycooperatingatopoieticgroa公司

6、。FL、TPO、SCF和G-CSF购自美国SantaCruz公司，IL-3、GM-CSF和EPO由军事医学科学院提供。小鼠抗人FITC标记的CD33抗体购自SantaCruz公司，小鼠抗人FITC标记的CD34抗体购自美国BectionDickinson公司。StemsepTM分选系统购自加拿大StemCellTechnologies公司，流式细胞仪FACSVantage购自美国BectionDickinson公司。　　药物　　人参总皂甙（totalsaponinsofpanaxginseng，TSPG）由重庆中药研究所惠赠，纯度95%以上，用IMD

7、M配成1mg/ml的工作液，正压过滤除菌。　　细胞来源　　正常骨髓细胞取胸外科无血液疾病患者切除的肋骨骨髓，淋巴细胞分离液（Ficoll，相对密度1077）分离单个核细胞（MNC），用RPMI1640培养液洗涤，用4号针头制备单细胞悬液，并计数MNC。　　脐血细胞取自足月妊娠正常分娩脐带血（重庆医科大学第一附属医院提供），采集按Broxmeyer报道方法进行，细胞在12小时内经Ficoll（相对密度1077）梯度离心，制成MNC悬液。　　CD34+HSC/HPC的分离纯化　　将（4-8）×107骨髓、脐血MNC悬浮于含2%胎牛血清的PBS缓冲液中

8、，加入antibodycocktail100μl，0℃30分钟，再加入磁性胶体60μl，0℃30分钟。采用C