il18基因启动子区607c-a位点多态性与痛风发病相关性论文

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1、IL18基因启动子区607C/A位点多态性与痛风发病相关性论文王新凤袁鹰李长贵刘世国【摘要】目的探讨山东汉族人白细胞介素18(IL18)基因启动子区607C/A位点单核苷酸多态性与痛风易感性之间的关系。方法应用聚合酶链反应序列特异性引物技术，检测100例痛风病人和100例非痛风病人IL18基因启动子区607C/A单核苷酸多态性位点的基因型。结果非痛风病人和痛风病人IL18基因启动子区607C/A位点3种基因型频率分别为：AA型0.18(18/100)、0.18(18/100)，AC型0.58(58/100)、0.67(67/100)，CC型0.24(24

2、/100)、0.15(15/100)。IL18基因启动子区607C/A位点的基因型和等位基因频率在两组之间分布无明显差异。结论山东汉族人群中IL18基因启动子区607C/A位点存在多态性，但痛风与该多态性无相关性。【关键词】痛风;白细胞介素18;多态性,单核苷酸ABSTRACTObjectiveToinvestigatethemononucleotidepolymorphism(SNP)atposition607atthepromoterregionofinterleukin18(IL18)genefortheassociationorphismofpromo

3、terregionintheIL18gene(607C/A)erspolymerasechainreaction(PCRSSP)andsequencing.ResultsThefrequencyofAAgenotypeinIL18607C/Aalcontrolsand0.18(18/100)inpatients.ThefrequencyofACgenotypealcontrolsand0.67(67/100)inthepatients.ThefrequencyofCCgenotypesofthefrequenciesofallelesandgenotypeofIL

4、18607C/AbetorphismexistsinChineseHanpopulationofShandongprovince.HoorphismofIL18607C/Abetorphism,singlenucleotide痛风是由于嘌呤代谢紊乱导致血尿酸增高而引起组织损伤的一组疾病,是由遗传性和获得性引起的尿酸排泄减少和嘌呤代谢障碍。随着经济的发展和生活水平的提高,原发性痛风患病率明显增高。原发性痛风发病机制复杂，涉及分子生物学、遗传学等诸多领域。研究证实痛风发作时滑膜细胞分泌一系列的炎症因子，导致炎症细胞的浸润，引起组织结构的破坏及功能的障碍。已有研究显示.fr

5、eelL，EDTA抗凝。按标准的酚氯仿法抽提DNA，所有DNA样本置-20℃保存。1.2.2PCR引物设计与合成根据IL18基因启动子607C/A位点多态性和已知的DNA序列，参照文献2设计PCR引物(表1)，由上海生工生物技术有限公司合成。其中特异性引物的3′端碱基根据多态性序列与其严格互补，通过特定的PCR反应体系扩增各等位基因的特异性DNA片段，产生相对应的特异性扩增条带;而内参照引物扩增包含有特异性突变位点的DNA片段，用于判定整个PCR体系的成功与否。表1IL18基因启动子607位点序列特异引物引物序列长度(bp)上游引物5′1.2.3PCR反应体系及反

6、应参数PCR扩增体系总体积为25μL，包括：Taq酶2U,10×PCR缓冲液(Mg2+plus)2.5μL，dNTP2.5mmol/L，基因组DNA100ng,IL18基因上下游引物各1μmol/L,阳性内对照引物1μmol/L，不足部分用双蒸水补足。PCR扩反应增条件：95℃预变性5min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1min，15个循环;然后94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min，共15个循环;最后72℃延伸7min。每次PCR反应均设阳性、阴性和空白对照(100bpDNALadderMarker作为分子质量标准)。每份样本的PCR扩

7、增产物在溴化乙锭染色的15g/L琼脂糖凝胶上电泳，紫外线灯下观察结果，自动凝胶成像分析系统进行成像和分析。1.2.4序列分析为验证PCRSSP反应结果的准确性，在两组的各基因型中随机选取样本共12份，用内参照引物进行PCR扩增后送北京三博远志公司进行序列测定。1.3统计学处理两组IL18基因位点的群体代表性采用HardyORIURAH,TSUTSIH,KOMATSUT,etal.CloningofanemaproductiobyTcellsJ.Nature,1995,378:8891.5VERVOORDEL