p38 mapk在嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放mcp

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1、p38MAPK在嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放MCP作者：王成彬，童红莉，田亚平,汪德清，黄振国，叶伟基，李洛谊，林伟基.L.编辑。【关键词】上皮细胞Regulatoryroleofp38MAPKforMCP1releasefromactivatedbronchialepithelialcellsbyeosinophils　　【Abstract】AIM:ToinvestigatethereleaseofmonocytechemoattractantprotEin（MCP）1fromthecocultureofhumanbronchiale

2、pithelialcellsandeosinophilsandtherelatedmechanisms.METHODS:MCP1inculturesupernatantinedbyCytometricBeadArray(CBA)KitinfloetrytopareMCP1releaseinbronchialepithelialcellsandeosinophilsculturedaloneortogether,andinvestigatetheinhibitiveeffectofSB203580,aselectiveinhibitorofp3

3、8MAPK,onMCP1release.Thereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RTPCR)matoryreaction.　　【KeyonocytechemoattractantprotEIn1;p38MAPK　　【摘要】　目的：探讨支气管上皮细胞与嗜酸性粒细胞联合培养过程中炎性介质的释放及其机制.方法：应用流式细胞微珠实验（CBA）方法定量比较嗜酸性粒细胞、支气管上皮细胞及其联合培养上清液中单核细胞趋化蛋白（MCP）1的释放以及p38MAPK抑制剂SB203580干预的影响；用逆转录聚合

4、酶链反应（RTPCR）分析联合培养过程中嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞MCP1基因表达的活化及SB203580对MCP1表达的抑制作用.结果：经嗜酸性粒细胞活化后，支气管上皮细胞中MCP1基因表达明显上调；嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞联合培养上清液中MCP1蛋白质释放显著增加［(1266±127)ng/Lvs(134±25)ng/L,P<0.001］；多聚甲醛固定后的嗜酸性粒细胞不能释放MCP1，但其在与支气管上皮细胞联合培养过程中仍可增加支气管上皮细胞释放MCP1［(773±48)ng/Lvs(107±15)ng/L,P<0.00

5、1］；p38MAPK抑制剂SB203580可有效抑制嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞表达MCP1基因，显著降低正常嗜酸性粒细胞和多聚甲醛固定嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞联合培养过程中MCP1的释放［(1335±115)ng/Lvs(481±42)ng/L和(868±89)ng/Lvs(239±26)ng/L,P<0.001］.结论：嗜酸性粒细胞可通过p38MAPK信号传导通路活化支气管上皮细胞表达MCP1，调控过敏性气道炎症反应.　　【关键词】支气管；上皮细胞；嗜酸细胞；单核细胞化学吸引蛋白质1；p38MAPK　　0引言　　过敏性哮喘的显

6、著特点就是大量炎性细胞，特别是嗜酸性粒细胞在支气管炎症部位聚积，活化后的嗜酸性粒细胞可通过脱颗粒释放嗜酸性粒细胞阳性蛋白（ECP）、主要碱性蛋白(MBP)等毒性蛋白，而这些毒性蛋白可造成支气管上皮损伤［1］.损伤的支气管上皮修复和气道重建可导致气道水肿、增厚、狭窄和对不同刺激的反应性增高，从而引发常见的咳嗽、呼吸困难等一系列临床症状.支管上皮对外环境的屏障功能已被广泛认识，但作为哮喘炎症反应的发生部位，其在过敏性哮喘发生、发展中的免疫调控作用未能引起广泛重视.我们通过嗜酸粒细胞与支气管上皮细胞接触培养为实验模型，探讨哮喘过程中嗜酸粒细胞从外周

7、血移行至支气管上皮后，通过活化支气管上皮释放炎性介质细胞趋化因子MCP1，调控过敏性哮喘炎性反应的过程.　　1材料和方法　　1.1材料密度1.082kg/LPercoll溶液:混合87.92mLPercoll原液(密度1.130,瑞典Amersham公司产品)，15mL1.5mol/LNaCl和47.1mL去离子水；抗CD16抗体磁珠和细胞磁性分离系统（MACS）购自德国MiltenyiBiotec公司；p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580购自美国Calbiochem公司；DMEM/F12，RPMI1640细胞培养

8、液购自美国GibcoInvitrogen公司；RNA抽提试剂TRIReagent购自美国MolecularResearchCenter公司；人细胞趋化因子CBA测定