蜂胶中掺杂物的鉴别——高效液相色谱指纹图谱法

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1、ICS85.140B47备案号：GH中华人民共和国供销合作行业标准GH/TXXXXX—XXXX蜂胶中掺杂物的鉴别—高效液相色谱指纹图谱法MethodforTheDeterminationofPropolis—HighPerformanceLiquidChromatographicFingerprintMethodXXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施中华全国供销合作总社发布GH/TXXXXX—XXXX目次前言II引言III1　范围12　规范性引用文件13　术语和定义14　原理25　试剂26　仪器和设备37　分析步骤38　定性判定39　结果表述

2、4附录A（规范性附录）　典型对照图谱5附录B（规范性附录）　蜂胶对照样品与杨树胶对照样品的制备方法77GH/TXXXXX—XXXX前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准采用专利ZL200510060230.8。本标准附录A、附录B为规范性附录。本标准由杭州蜂之语蜂业股份有限公司提出本标准由中华全国供销合作总社归口。本标准起草单位：杭州蜂之语蜂业股份有限公司、浙江省食品药品检验所。本标准主要起草人：***、***、***、***、***。本标准为首次发布。7GH/TXXXXX—XXXX引言本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，

3、涉及到本文件相关的专利（ZL200510060230.8）的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得：专利持有人：杭州蜂之语蜂业股份有限公司。地址：浙江省杭州市桐庐县乔林路898号。请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。7GH/TXXXXX—XXXX蜂胶中掺杂物的鉴别—高效液相色谱指纹图谱法

4、1　范围本标准规定了高效液相色谱指纹图谱鉴别蜂胶掺杂物的方法。本标准适用于产地来源于中国境内的蜂胶原料、以食用酒精为溶剂提取的精制蜂胶及其蜂胶制品中蜂胶掺杂物的鉴别。本标准鉴别方法为定性鉴别方法。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）保健食品中总黄酮的测定方法3　术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1　指纹图谱指蜂胶、杨树胶等

5、经过适当处理后，采用高效液相色谱法分析，得到的能够反映其化学特征的色谱图3.2　相似度表征两张指纹图谱相似程度的参数3.3　特征色谱峰色谱图中具有一定特征性的色谱峰3.4　掺杂物蜂胶中掺入的非蜂胶物质3.5　杨树胶7GH/TXXXXX—XXXX用杨树芽、杨树叶等人工制成的类蜂胶物质1.1　真蜂胶正宗的蜂胶1.2　伪蜂胶用非蜂胶物质制成的类蜂胶物质1.3　掺伪蜂胶掺杂了非蜂胶物质的蜂胶2　原理样品经过甲醇提取，用0.4%H3PO4酸化，以流动相定容，以高效液相色谱在360nm波长下测定样液的指纹图谱，根据样品与蜂胶、杨树胶及黄酮类化合物对照图谱的相似程度

6、进行比较，使用中药指纹图谱相似度软件计算样品的相似度，定性鉴别蜂胶中的掺杂物。3　试剂3.1　标准品3.1.1　咖啡酸：标准品，纯度≥98%3.1.2　芦丁：标准品，纯度≥92%3.1.3　槲皮素：标准品，纯度≥98%3.1.4　杨梅酮：标准品，纯度≥98%3.1.5　芹菜素：标准品，纯度≥98%3.1.6　莰菲醇：标准品，纯度≥98%3.1.7　松属素：标准品，纯度≥98%3.1.8　柯因：标准品，纯度≥98%3.1.9　高良姜素：标准品，纯度≥98%3.2　磷酸：分析纯。3.3　甲醇：色谱纯。3.4　0.4%（V/V）磷酸：吸取4ml磷酸（5.2）

7、到加有900ml水的容量瓶中，用水定容至1000ml。3.5　参照物溶液：准确称取咖啡酸、芦丁、槲皮素、杨梅酮、芹菜素、莰菲醇、松属素、柯因和高良姜素标准品各10.0mg（按标准物质证书上标示的浓度折算后得到）,置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5mL，置10mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，此标准溶液每1mL含0.05mg咖啡酸、芦丁、槲皮素、杨梅酮、芹菜素、莰菲醇、松属素、柯因和高良姜素。3.6　水：实验用水。3.7　蜂胶对照样品：制备方法见附录B。3.8　杨树胶对照样品：制备方法见附录B。7GH/TXXXXX—XX

8、XX1　仪器和设备1.1　电子天平：感量0.0001g。1.2　高效液相色谱仪配紫外检测器。1