砂仁及其混淆品的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究

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1、砂仁及其混淆品的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究作者：王祥培，吴红梅，赵杨，孙宜春，靳凤云，万德光【摘要】　　目的建立砂仁及其混淆品的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱鉴定方法。方法采用RP-HPLC（DAD）法，梯度洗脱，测定阳春砂、海南假砂仁及艳山姜的指纹图谱，并作相似度比较分析。结果砂仁及其混淆品的HPLC指纹图谱有明显差异。结论HPLC指纹图谱具有重现性好，特征性强，方法简便等特点，可用于砂仁与其混淆品药材的鉴别。【关键词】砂仁混淆品高效液相色谱指纹图谱　　Abstract：ObjectiveToestablishHPLCfingerprintfortheiden

2、tification　ofAmomumvillosumanditsadulterants.MethodsChromatographicfingerprintofAmomumvillosum，AmomumchinenseandAlpiniazerumbetinedbyRP-HPLC(DAD)andthegradientelutionmodeatographicseparation,datailarityEvalutionSoftilarityofsamples.ResultsThereomumvillosumanditsadulterants.ConclusionHP

3、LCfingerprintmethodisrepeatableandfeasibleandcanbesuitableforidentifyingAmomumvillosumanditsadulterants.　　Keyomumvillosum;Adulterants;HPLC;Fingerprint　　砂仁为姜科植物阳春砂AmomumvillosumLour.绿壳砂A.villosumLour.var.xanthioidesT.L.omumvillosumLour.的干燥成熟果实；海南假砂仁购于四川成都，经笔者鉴定为姜科植物海南假砂仁AmomumchinenseCh

4、unexT.L.a公司DiamonsilC18（250mm×4.6mm,5μｍ）；流动相为乙腈（A）与0.1%磷酸（B）梯度洗脱，梯度条件0→11min，A（%）0.5～5，B（%）99.5～95，11→61min，A（%）5～20，B（%）95～80，61→75min，A（%）20～25，B（%）80～75，75→80min，A（%）25～25，B（%）75～75；流速0.8ml/min；柱温25℃；检测波长258nm；参比波长360nm；分析时间80min；进样量10μl。　　2.2供试品的制备精密称取药材细粉2.0g，加石油醚（60～90℃）50ml，超声15

5、min，滤过，残渣挥干溶剂，加甲醇50ml回流1h，滤过。残渣加甲醇50ml，继续回流1h，滤过，合并两次滤液。置蒸发皿水浴挥干溶剂，残渣加甲醇溶解并定容至10ml。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。　　2.3对照品的制备精密称取槲皮苷对照品适量，加甲醇制成24.72μg/ml的溶液，作为对照品溶液。　　2.4方法学考察以购于广东深圳的阳春砂药材为样品，对其稳定性﹑仪器精密度﹑重复性作了相应考察，结果证明稳定性及重复性良好。　　2.4.1精密度实验取同一份供试品溶液，重复进样6次，直观观察指纹图谱的全貌无明显差别，用相似度软件计算，在同一台仪器测得色谱

6、指纹图谱的相似度分别为：0.986，0.992，0.991，0.981，0.982，0.972，均大于0.95。表明该仪器的精密度良好。符合指纹图谱检测要求［3］。　　2.4.2稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在0，2，6，12，20，30h进行检测，直观观察指纹图谱的全貌无明显差别，用相似度软件计算，在同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为：0.976，0.991，0.980，0.971，0.993，0.985，均大于0.95。表明在30h内供试品溶液的成分是稳定的。符合指纹图谱检测要求［3］。　　2.4.3重复性实验取同一产地的供试品5份，同法检测，直观观察

7、指纹图谱的全貌无明显差别，用相似度软件计算，在同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为：0.981，0.955，0.965，0.973，0.979，均大于0.95。表明该方法的重复性较好，符合指纹图谱检测要求［3］。.L.编辑。　　2.5指纹图谱建立精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按选定的色谱条件，进行检测。同一实验条件下，测定所有供试品HPLC色谱图。根据不同供试品测定结果所给出的峰数、峰值（积分值）和峰位（相对保留时间）等相关参数进行分析、比较，制定优化的指纹图谱见图1～3。　　2.6.1共有指纹峰标定比较购于贵州贵阳、四川成都及广