如何定量测量水溶性蛋白

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1、如何定量测量水溶性蛋白?水溶性蛋白定量测量方法，一般豆粕3-7%左右，棉粕菜粕2-6%,DDG7-10%,秘鲁鱼粉在22%左右，巴拿马鱼粉和国产蒸汽鱼粉在16%左右,全鸡肉粉7%左右(可能是脂肪的原因所以有点偏低)（占粗蛋白的比例）。定量测量水溶性蛋白方法如下：　　1、称样2g左右，精确到0.0001g,放到三角瓶中。　　2、加蒸馏水200ml　　3、震荡30分钟　　4、过滤　　5、取虑液25ml，加催化剂2g，加浓硫酸10ml，消化（空白用25ml蒸馏水代替滤液）　　6、以下同测粗蛋白方法标准：一般豆粕3-7%左右，棉粕菜粕2-6%,DDG7-10%,秘鲁鱼粉在22%左右，巴拿

2、马鱼粉和国产蒸汽鱼粉在16%左右,全鸡肉粉7%左右(可能是脂肪的原因所以有点偏低)（占粗蛋白的比例）。本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。 1仪器和用具 1.1凯氏烧瓶：50m1； 1.2圆底烧瓶：100m1； 1.3万用电炉； 1.4锥形烧瓶：100m1； 1.5微量滴定管：5ml、刻度0．01m1； 1.6容量瓶：50m1； 1.7移液管：5m1； 1.8量筒：10ml； 1.9洗耳球： 1.10凯氏微量蒸馏装置(见下图)、胶管等。  凯氏微量蒸馏装置图     1、蒸馏瓶；2、冷凝管；3、承接瓶；4、回流管；5、漏斗；     6、活塞；7、簧夹；8、烧瓶 2试

3、剂 2.1浓硫酸过氧化氢水混合液(2：1：3)：在t00vtl水中缓慢加入浓硫酸 200ml，冷却后再国入30％过氧化氢300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月； 2.2混合催化剂：硫酸铜(cuso4·5H20)10g，硫酸钾(A．R)100g，硒粉0.2g， 在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用； 2.3 40％氢氧化钠溶液； 2.4 2％硼酸溶液；2.5 O．01N盐酸溶液； 2.6  甲基红乙醇溶液：0.1g甲基红溶于75ml 95％乙醇中(先在研钵中加乙醇 研磨)； 2.7次甲基蓝乙醇溶液：0.1g次甲基蓝溶于80m195％~．醇中。临用时将以上 两液按2：1比

4、例混合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈 绿色。 3操作方法 3.1消化     按照含有10～30mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.2～0．3g(w， 精确到0. 0001g)，用蜡光纸卷着倒入50nnl凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g，同 时加入硫酸过氧化氢水混合液3～5m1，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱 内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待 泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状 时，再继续加热沸腾l0min，取出待消化液冷却至室温后，加水10～20m1，再 待溶液温度降到室温后，干

5、净地转入50rnl容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。 3．2蒸馏     按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。     在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液 使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。     量取30m11％硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端 插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5m1，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml， 冲洗漏斗5。量取40％氢氧化钠溶液1m1，提起活塞注入瓶1内，立即用水2～ 5m1冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。     打开簧夹7，关闭活

6、塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时， 经2min降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min后，用水冲洗管下端。     蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶l内溶液全部吸入管4中，放松 簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水40～50ml，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一 次备用。 3．3滴定     用0．01N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。     为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。 4结果计算 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算： 粗蛋白质(干基%)=（V1-V0）* N * 14 * P *50/V * 1000

7、0/W（100-M） 式中：v——蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml；     V1广实验用去的盐酸溶液体积，m1； v。——空白试验用去的盐酸溶液体积，m1；     N——盐酸溶液的当量浓度，N； 14——每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数；     P——蛋白质换算系数(小麦5．7，其他谷物及豆类6 25)；     w——试样重量，mg；     M_试样水分百分率，％。     双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15．O％以下时，不超过O 2％；粗蛋白 质含量在15 1％以上时