参附注射液对阿霉素致心肌细胞钙超载的影响

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1、参附注射液对阿霉素致心肌细胞钙超载的影响作者：闫福曼周乐全康亚丽李小英罗荣敬【摘要】　　【目的】观察参附注射液对阿霉素致心肌细胞钙超载的影响。【方法】选用SD大鼠随机分为正常对照组，正常生理盐水组，阿霉素组，阿霉素加生理盐水组，参附注射液低、中、高剂量组（剂量分别为0.3、0.6、1.2g·kg-1·d-1）；除２个正常组外，其他组均采用阿霉素腹腔注射复制模型，参附注射液组同时给药2周；造模3周后急性分离单个心肌细胞，采用离子图像法检测各组心肌细胞内游离Ca2+浓度，膜片钳技术记录各组细胞膜上L型钙通道

2、电流的变化。【结果】阿霉素组心肌细胞内游离Ca2+水平显著升高，细胞膜上L型钙通道的平均开放概率增加，平均电流幅度显著增大（P<0.05或P<0.01）；参附注射液高、中、低剂量均可显著降低心肌细胞内Ca2+水平，降低细胞膜上L-型钙通道的平均开放概率及平均电流幅度（均P<0.05），而各剂量组间作用无显著性差异（P>0.05）。【结论】参附注射液拮抗阿霉素所致心肌细胞钙超载的作用可能与其减少外钙内流、降低内钙释放有关。【关键词】参附注射液/药理学阿霉素/毒性钙超载疾病模型动物大

3、鼠　　阿霉素(adriamycin，ADR)是临床上常用的蒽环类抗肿瘤药物，有抗瘤谱广、作用强的特点。然而，ADR具有严重的心脏毒性作用，出现剂量依赖性的心律失常，甚至心衰，和其他抗癌药物同时应用还可加重心肌的损害。因此心脏毒性成为ADR提高剂量或联合用药的主要障碍［1］。研究表明［2］，ADR心脏毒性作用机制主要集中在自由基的生成、细胞内钙超载、核酸的合成障碍和能量代谢障碍等方面。参附注射液是由人参(红参)、附片(黑附子)等中药提取物混合而成，主要有效成分为人参皂苷和乌头类生物碱，具有保护心肌超微结构、

4、抗心律失常、增加冠脉血流量、抗脂质过氧化等作用［3］。参附注射液可减少ADR心肌毒性［4］，并通过抗自由基来保护阿霉素心肌损伤［5］。钙超载是阿霉素产生心肌毒性作用，导致心衰的一个重要因素［6］。本文从钙超载途径观察参附注射液对ADR心脏毒性的保护作用，现报道如下。　　1材料与方法　　1.1动物SD大鼠，SPF级，体质量180～200g，雌雄兼用，由广州中医药大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK粤20030001。　　1.2主要仪器与试剂CK40型光学倒置显微镜(日本Olympus)；ST4040型

5、染色机(德国)；EG1160型石蜡包埋机(德国)；心脏Langendorff灌流系统由埃德仪器（上海）国际贸易有限公司提供；AXT0SK0P2型正置显微镜(德国ZEiSS)；LP5150型TillVision图像处理系统（德国）；EPC9型膜片钳放大器（德国）；MP285型微电极拉制仪（美国）；Pulse＆Pulsefit和TAC数据采集和信号分析处理系统（德国）；阿霉素(浙江海正药业有限公司，批号20050507)；参附注射液(雅安三九药业有限公司，批号20043116)；牛血清白蛋白（BSA，R

6、oche分装)；Ⅰ型胶原酶(gCl2、5mmol/LGlucose，用NaOH调至pH值为7.2～7.4。高钾溶液：70mmol/LLGlutamicacid、25mmol/LKCl、20mmol/LTaurine、10mmol/LKH2PO4、3mmol/LMgCl2、10mmol/LGlucose、10mmol/LHEPES、0.5mmol/LEGTA，用KOH调至pH值为7.2～7.4。电极内液：110mmol/LBaCl2、10mmol/LHEPES，用BaOH2调pH值至7.2～7.4。电极外

7、液：140mmol/L天门冬酸钾、10mmol/LEGTA、10mmol/LHEPES、5mmol/LGlucose、0.001mmol/L河豚毒素（TTX），用KOH调pH值至7.2～7.4。　　1.4分组及给药SD大鼠随机分为正常对照组，正常生理盐水组，阿霉素组，阿霉素加生理盐水组，参附注射液低、中、高剂量组（简称参附低、中、高剂量组）。每组8只，雌雄各半。正常对照组：不做特殊处理。正常生理盐水组：腹腔注射生理盐水。阿霉素组：实验开始后第2、4天腹腔注射1mg/kgADR，第6、8天腹腔注射2mg/k

8、gADR，第10、12天腹腔注射3mg/kgADR，第14、16天腹腔注射4mg/kgADR，16d累计用药剂量达20mg/kg；然后取左心室心肌组织，苏木素-伊红（HE）染色，镜下观察心尖处心肌细胞、细胞间质等的排列情况，确定造模成功与否。阿霉素加生理盐水组：造模后1周，腹腔注射等容积的生理盐水，每日1次，共2周。参附组：造模后1周，按高、中、低剂量组分别腹腔注射参附注射液0.3、0.6、1.2g/kg，每日1次，共2周。