半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌bgc823细胞增殖的实验研究

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1、半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究王萍，李娟，刘喜平，李德兴，高波【关键词】半夏泻　摘要：目的：研究半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BGC823细胞增殖的影响。方法：采用血清药理学方法和MTT法及台盼兰染色法观察半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BGC823细胞的敏感性及生长抑制作用。结果：辛苦组对人胃癌BGC823细胞的生长抑制作用最强，显著高于辛开组、苦降组、辛甘组、苦甘组、甘补组（P0.05）。结论：半夏泻心方中对BGC823细胞增殖起主要抑制作用的药组为辛开

2、、苦降的配伍形式。辛开、苦降配伍后（辛苦）有显著的协同增效趋势，而其他配伍药群可能存在拮抗作用。提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的治则治法之一。　　关键词：半夏泻心方；人胃癌BGC823细胞；配伍；生长抑制　半夏泻心方为传统经方，药少力专,配伍严谨，为治疗脾胃病的代表良方，其现代研究也显示出了多方面的消化系统作用机理〔1〕。近年来本方在胃癌的防治中已有一定的临床应用〔2-4〕，但至今尚未见到该方抗肿瘤的相关基础研究。为此，我们采用血清药理学和分子生物学的方法及实验技术，紧密结合半夏泻心方所反映病机的

3、配伍关系，对半夏泻心方及其配伍含药血清对体外人胃癌BGC823细胞的增殖进行了初步研究，以期进一步为研究半夏泻心方抗肿瘤的机制奠定基础。现报告如下。　　1实验材料　　1.1动物　　家兔20只，体重2.0～2.5kg,由兰州生物制品研究所实验动物中心提供。　　1.2药物及试剂　　半夏泻心方药材由甘肃中医学院附属医院提供，经甘肃中医学院中药鉴定教研室鉴定符合药典规定；含10%胎牛血清的RPMI1640培养液；0.25%胰蛋白酶消化液；5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracia，简称5-FU），临用时用RP

4、MI1640培养液稀释至所需浓度。　　2实验方法　　2.1药物制备　　依据原方比例〔5〕，按中医理论及配伍规律分为7组：全方组（半夏12g、干姜9g、黄芩9g、黄连3g、人参9g、大枣4枚、甘草9g）、辛开组（半夏12g、干姜9g）、苦降组（黄芩9g、黄连3g）、辛苦组(半夏12g、干姜9g、黄芩9g、黄连3g)、甘补组（人参9g、大枣4枚、甘草9g）、苦甘组（黄芩9g、黄连3g、人参9g、大枣4枚、甘草9g）、辛甘组（半夏12g、干姜9g、人参9g、大枣4枚、甘草9g）。将各组药物饮片浸泡30min

5、，煎煮两次，每次30min，纱布粗滤去渣，全方药液浓缩为含生药2g/mL，其他配伍煎液中生药量同原方，煎法相同，煎后浓缩体积与全方煎液相同，使各配伍组中生药浓度与全方中各相应生药浓度相同。　　2.2含药血清的制备　　参照李振光等〔6〕文中的方法：每组选家兔2只，实验前禁食12h，灌胃给药，各药物组每只家兔灌服试验药物，对照组给予相同体积的生理盐水。给药剂量：每次26mL/kg，相当于60kg成人日服用量的10倍；给药方式：连续灌胃3次，第1、2次间隔20h，第2、3次间隔4h；采血时间：第3次给药后2

6、h无菌条件下心脏采血。静置4h，3000r/min离心20min，分离血清（药物血清，DS），同种条件下药物血清混匀，56℃条件下水浴30min灭活，-20℃冰箱保存备用。经培养实验没有微生物生长。　　2.3细胞的培养　　BGC823细胞（人胃癌细胞株），由兰州大学细胞室引进。将BGC823细胞用含有青霉素、链霉素各100U/mL、15%小牛血清的RPMI1640培养液培养。在5%CO2、37℃培养箱中培养2~3d后进行传代培养。　　2.4MTT法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BGC823细胞的敏

7、感性　　取对数生长期的BGC832细胞，细胞存活率达95%以上，先用0.25%胰蛋白酶消化培养细胞，再用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200μL。在细胞液中加入最终浓度分别为5%、10%的全方、辛开、苦降、辛苦、甘补、辛甘、苦甘的兔血清，各浓度设三个平行孔，并设正常兔血清对照组及5-FU阳性对照组，平行做3板，将培养板放入CO2培养箱，在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下分别培养24h、48h、72h，每孔加入MTT溶液（

8、5mg/mL）20μL，37℃继续孵育4h后，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每孔加入150μL二甲基亚砜（DMSO），振荡10min，使甲充分溶解，在490nm波长下，用酶联免疫检测仪测定各孔光吸收值（A），按下列公式求出细胞存活率。每个样品计数4次，根据3次实验结果求平均值和标准差(x-±s，n=3)。细胞存活率=试验组光吸收值（A）对照组光吸收值（A）×100%x　　2.5台盼兰染色法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BGC823细胞生长的影响取