实验十三免疫浊度试验

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1、医学免疫学实验指导实验十三免疫浊度试验由长沙达尔镩生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。BioRike简介：BioRike（中文简称"博瑞克"）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌，甶旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命

2、科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。【实验目的】掌握免疫浊度测定的原理，熟悉其操作方法，了解其应用及意义。【实验原理】抗原和抗体在液相中反应，所形成的免疫复合物使液相出现浊度，复合物的量与浊度呈正相关。这种浊度可以反射、散射和吸收入射的光线，使入射光衰减，因此可通过测定透射光衰减（以A值表示）或散射光强度来检测抗原抗体反应。本实验以常用透射比浊法检测人血清IgG为例。在反应系统中IgG抗体过量时所形成

3、的免疫复合物与血清IgG量呈正相关，而形成的浊度大小与入射光的衰减呈正相关，因此测定A值反映液相中的抗原量，通过参照标准曲线或标准品数值的计算，即可得知待测血清中IgG含量。【实验用品】1.标本：待测人血清、标准血清（混合正常人新鲜血清X人IgG标准品（或冻干人血清IgG参考标准X2.PEG溶液：PEG6000-80004.0g、NaFl.Og、Na2HPO4.12H2O10.15g、NaH2PO4•2H2Ol.Og、NaN3O.lg，加蒸馏水至100ml。3•其他试剂：羊抗人IgG抗血清、生理盐水、

4、蒸馏水。4.主要器材：分光光度计（721或731等X水浴箱、微量移液器、刻度吸管、试管等。【步骤和方法】1.系列标准管准备：用生理盐水稀释人IgG标准品或人血清IgG工作标准，使其浓度分别为5.5g/L、ll.Og/L、22.0g/L、44.0g/L（浓度可根据不同制剂略有变动X取上述IgG标准液1O(J

5、,分放于4个试管中；另取生理盐水1O(J

6、,放于第5只试管中，作为空白对照分别做好标记。1.血清管准备：将待测血清和标准血清均做1:10稀释(0.1ml血清+1.0ml生理盐水)，各取10pl,分放

7、于预先标记的试管中。2.抗体制备：用PEG溶液稀释羊抗人IgG抗血清，注意保持适宜的抗体浓度。3.抗原抗体反应:向各标准管和血清管中分别加入稀释抗血清，混匀后至37°C水浴30min。4.测定：用分光光度计进行测定，使用340nm波长，用生理盐水校正零点。逐次测定各标准管和血清管，准确读取和记录各自的A值。【结果和评价】1.以4个浓度的IgG标准品的A值为纵坐标，以其分别的IgG含量为横坐标，绘制出标准曲线。各血清管IgG含量可从标准曲线上查得。标准血清的IgG含量应该处于正常参考值的范围以内，否则应

8、考虑实验结果可能有问题。2.也可用分段直线计算法得到结果，举例如下：标准管序号标准管IgG含量(g/L)标准管A值皿清管A值12345.511.022.044.00.040.080.140.260.10以上例子中，血清管的A值位于标准管1和标准管3之间，计算如下(22.0-11.0)/(0.14-0.08)x(0.10-0.08)+11.0=14.7(g/L)3.正常血清IgG参考值8.0-16.0g/L。［注意事项］1.由于不同制品羊抗人IgG抗血清的效价不同，所以对每批制品都需要测定最适宜的抗体浓

9、度。1.PEG的分子量不同，性质也有所区别；PEG溶液浓度不同所沉淀的免疫复合物也不同，浓度越大沉淀的复合物越小。20g/L浓度只能沉淀较大复合物，40g/L浓度可沉淀较小复合物，但浓度＞50g/L,PEG选择性沉淀免疫复合物的特征即行消失。【临床意义】1.血清IgG降低，主要见于先天性低IgG血症，例如Bruton型免疫球蛋白缺乏症和联合免疫缺陷病等。亦可见于获得性低免疫球蛋白血症，常低于5.0g/L,例如剥脱性皮炎、肠淋巴管扩张症、肾病综合征、淋巴肉瘤、霍奇金病等。2.血清IgG升高，主要见于各种

10、感染性疾病、肝脏疾病（慢性活动性肝炎、原发性胆汁型肝硬化等）和自身免疫病等。［思考题］1.免疫浊度实验的原理及试验中的主要注意事项是什么？2.血清IgG异常时涉及哪些疾病？