柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响

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1、柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响【关键词】柚皮素;血小板聚集;凝血酶　　柚皮素(naringenin，NGEN)，是一种从柑橘类水果、普洱茶籽、长白瑞香等植物中提取的天然苦味化合物[1]。近年来，对柚皮素的研究日益增多，发现其具有多种药理活性[2]。而柚皮素是否对血小板聚集也起作用，我们采用体外血小板聚集法，利用凝血酶为诱导剂，用荧光倒置显微镜观察柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。现将结果报道如下。　　1材料与仪器　　1.1动物大白兔4只，♂♀兼用，体质量(2.0±0.2)kg，由广东医

2、学院动物中心提供。　　1.2药品和试剂柚皮素、凝血酶、N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(Hepes)购自Sigma公司。其余为国产分析纯或生化纯试剂。　　1.3仪器NIKONTE2000-E荧光倒置显微镜，德国。　　2方法　　参照文献[3]：兔血用塑料管收集和用ACD(86mmol/L柠檬酸钠，111mmol/L葡萄糖，53mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，800r/min离心10min，离心2次，取上清，3000r/min离心15min。沉淀中加Tyrode-Hepes缓冲液(140mm

3、ol/L氯化钠，5mmol/L氯化钾，1mmol/L氯化镁，10mmol/LN-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸，10mmol/L葡萄糖，pH7.4)调节至血小板数为3×1011～4×1011/L。血小板聚集用NIKONTE2000-E荧光倒置显微镜来观测。血小板悬液(0.2ml)与药物孵育5min，然后用凝血酶(500U/L)作用1min，观测聚集情况。　　3结果　　显微镜下空白对照观测到血小板松散(见图1)，凝血酶(500U/L)诱导的血小板聚集，显微镜下观测到聚集粘连成一片(见图2)，用柚皮素

4、作用后，随着药物浓度的增加，血小板没有聚集集合粘连(见图3～6)。　　研究血小板聚集情况的方法，通常是采用血小板聚集仪来检测的，然后通过计算其聚集率来观察血小板聚集情况，而本实验采用荧光倒置显微镜直接观察柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响，结果明了，方法新颖。图1空白对照图2凝血酶(500U/L)诱导的兔血小板聚集图380μmol/L图4160μmol/L柚皮素对凝血酶(500U/L)柚皮素对凝血酶(500U/L)　　诱导兔血小板聚集的影响诱导兔血小板聚集的影响图5320μmol/L图6640μ

5、mol/L柚皮素对凝血酶(500U/L)柚皮素对凝血酶(500U/L)诱导兔血小板聚集的影响诱导兔血小板聚集的影响据文献报道，柚皮素在降血脂、镇静、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌、抗动脉粥样硬化等方面具有较强的生物活性[2]，但对体外抑制血小板聚集的研究尚未见报道。本文实验结果表明，柚皮素具有抑制凝血酶诱导的血小板聚集的作用，随着柚皮素浓度的增大，对血小板聚集的抑制也增加，具有明显的抗凝血作用。柚皮素抑制抗血小板聚集的机制则有待于进一步的研究。【参考文献】　[1]冯颖倩，左学兰，李瑞芳，等.柚皮素对阿霉素损

6、伤的正常血细胞的保护作用[J].中国实验血液学杂志，2008，16(4):790.　　[2]杨宏亮，田衍，李沛波，等.柚皮苷及柚皮素的生物活性研究[J].中药材，2007，30(6)：752.　　[3]Liu，TangbXX，ChenXG，etal.Effectsofscorpionvenombioactivepolypolypeptidesonplateletaggregationandthrombosisandplasma6-keto-PGF1alphaandTXB2inrabbitsandra

7、ts[J].Toxicon，2005，46(2):230.　　[5]王振义，李家增，阮长耿.血栓与止血基础理论与临床，第2版[M].上海:上海科技出版社，1996：378.　　[6]韩纪举，赵晓民，焦鹏，等.白花丹参对小鼠血小板黏附功能及血液流变学的影响[J].中药材，2007，30(6)：699.