hplc法测定维他参颗粒中维生素b2的含量

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1、HPLC法测定维他参颗粒中维生素B2的含量卜文奎，杜娟，段广珍，张晓宇，张男【关键词】HPLC；inB2维他参颗粒由人参、山楂及多种维生素组成，维生素B2为该方的有效成分之一，维生素B2是人体中许多重要辅酶的组分。测定维生素B2含量的方法有荧光分光光度法等，笔者采用HPLC法测定其含量，经方法学考察，其精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，为维他参颗粒的质量控制提供了实验依据，从而有效控制其质量。1仪器与试药维生素B2对照品（100369-200301，供含量测定用）购于中国药品生物制品

2、检定所，纯度大于98.5%。维他参颗粒自制，Agilent1100series高效液相色谱仪（G1311AQuatPump，G1314AV，150mm×4.6mm）流动相：乙腈-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）。检测波长：246nm；柱温：30℃；流量：1ml/min；理论塔板数按维生素B2对照品峰计算不少于5000。2.2测定波长的选择取少量维生素B2的标准品溶液，稀释，置U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计下于200～400nm波长下扫描，

3、在225nm、267nm处均有最大吸收，选择267nm作为HPLC的测定波长。2.3流动相的选择经参阅文献〔1～4〕，分别对甲醇-0.05mol/L，KH2PO4磷酸溶液（14∶86，pH3.0）、甲醇-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（107∶500∶0.12∶4.6）、乙腈-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）、乙腈-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（5∶93.92∶0.21∶0.87）四种流动相系统进行筛选，结果维生素

4、B2在乙腈-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）流动相条件下达到基线分离，峰形对称，维生素B2的阴性对照液无干扰，保留时间适宜。故确定维生素B2流动相为乙腈-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）。色谱图见图1、2。2.4对照品溶液制备精密称取维生素B2对照品15.76mg，置100ml量瓶中，以乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液温热溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置100ml量瓶中，以乙腈-水

5、-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含维生素B20.00788mg的溶液。2.5线性关系考察精密吸取维生素B2对照品溶液3、6、9、12、15、18μl进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量x为横坐标、峰面积值y为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y=4038.2x-4.9208，r=0.9995，结果表明，维生素B2进样量在0.0473～0.2837μg范围内线性关系良好。2.6供试品溶液制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.3g，精密称定，置50ml

6、具塞锥形瓶中，精密加入乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3方法学考察3.1精密度试验精密吸取供试品溶液10μl，重复进样5次，测得峰面积，维生素B2积分值的相对标准偏差0.8%，表明仪器精密度良好。3.2稳定性试验精密吸取供试品溶液10μl，在0、2、4、6、8h各进样10μl，测其峰面积，维生素B2积分值的相对标准偏差为3.0%，说明样

7、品在8h内稳定。3.3重复性试验精密称取供试品5份，每份约0.3g，照供试品溶液制备方法制备，每次进样10μl，测维生素B2含量，结果维生素B2含量相对标准偏差为2.3%，表明方法重复性较好。3.4加样回收率取已知维生素B2含量的样品（0.60mg/g），研细，取5份样品，每份0.15g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入维生素B2对照品溶液5ml（浓度为0.0169mg/ml），再精密加入乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液20ml，按供试品溶液制备方法操作并进行含量测定，求得平

8、均回收率分别为97.9%；相对标准偏差RSD为1.7%，见表1。表1维生素B2加样回收率考察结果（略）注：平均回收率为97.9%，RSD为1.7%4样品的测定分别取10批样品，按上述色谱条件进行测定，结果见表2。表210批样品中维生素B2含量测定结果（略）5小结维生素B2对光极为敏感，用棕色瓶避光处理样品，维生素B2在水中不溶而溶于稀碱溶液，但在稀碱溶液中不稳定，