大鼠心肌缺血后适应（ipoc）和心肌toll样受体4（tlr）

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1、大鼠心肌缺血后适应（IPOC）和心肌TOLL样受体4（TLR）大鼠心肌缺血后适应（IPOC）和心肌TOLL样受体4（TLR4）在心肌再灌注损伤中的作用急性心血管疾病在我国发病率逐年攀升，这不仅使心肌缺血再灌注治疗在临床应用增加（心肌缺血再灌注治疗包括溶栓、经皮穿刺冠状动脉介入治疗(percutaneoustransluminalcoronaryinternention,PCI)和冠状动脉旁路移植术（coronaryarterybypassgraft,CABG等）。同时也增加了心肌缺血再灌注损伤的发生。这是继急性心肌梗死（acu

2、temyocardialinfarction,AMI）后，向临床医生提出的又一新的挑战。心肌缺血再灌注损伤（myocardialischemia/reperfusioninjury，MIRI）是在心肌缺血的急性心血管事件基础上，重新恢复冠脉血流之后，原缺血心肌组织损伤反而加重,甚至发生不可逆损伤的现象，比如心肌细胞加速死亡、心脏血流动力学持续障碍、出现再灌注心律失常，血管内皮功能障碍等[1]。在面对心肌缺血再灌注损伤的临床难题上，国内外已经进行了大量的动物实验研究及探索，并且已经找到了能够减轻这种再灌注损伤的方法。研究证明心肌

3、缺血预适应(Ischemicpreconditioning,IPC)，心肌缺血后适应(Ischemicpostconditioning，IPOC)以及优化TOLL样受体4（Toll-likereceptor-4,TLR4）等方法均可保护缺血再灌注心肌组织，减轻MIRI[2-4]。近期大量研究证明TOLL样受体4参与心肌缺血再灌注损伤，并且通过抑制TLR4受体，干预TLR4传导通路，可以对心肌缺血再灌注损伤发挥保护作用。目前国内外有研究表明将抑制TLR4及干预其通路与IPC相结合通过药物预处理缺血再灌注心肌，可以达到保护心肌缺血

4、再灌注损伤的目的。2011年景桂霞[5]等在SD大鼠心肌缺血再灌注模型研究发现：与假手术组（Shame）组比较，IR组和七氟醚预处理（sP）组TLR4、核因子（NuclearfactorKappa,NF-KB）和肿瘤坏死因子（TNF-a）的蛋白表达上调(P〈0．05)；与IR组比较，sP组TLR4、NF-KB和TNF-a的蛋白表达下调(P〈0．05)。病理学结果显示：SP组心肌细胞损伤较IR组减轻。提示七氟醚预处理可通过抑制TLR4表达上调，降低炎性反应，从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。但是在临床工作中我们不可能针对患者还未发

5、生病变的某支血管进行反复的缺血及再灌注，以达到对将来可能出现病变的心肌进行保护的目的，这不符合医学伦理学。因此，预适应仍处于动物实验阶段，这也说明了预适应的局限性。为了弥补这一缺陷，2003年赵[6]等提出了心肌缺血后适应（Ischemicpostconditioning，IPOC）是心肌发生缺血后立刻对相应病变冠状动脉进行短暂的、多次的开通及再闭的过程，最后持续恢复冠状动脉血流。大量动物研究表明，心肌缺血后适应即对缺血心肌首先进行多次短暂的血管再通及缺血，也能达到“减少梗死面积，减缓心肌细胞凋亡，改善血管内皮功能，减轻缺血心

6、肌水肿”[7-12]的目的。说明缺血后适应在保护缺血心肌保护作用上与预适应有同样的效果。心肌缺血后适应的操作方式预示着其临床推广的可能性较大。但是对于没有进行冠脉造影条件的患者，及医院，IPOC的治疗仍然存在很大的局限性。这要求我们能够进一步探索，研究新的，方便，有效，适合广泛推广临床的后适应治疗方法。假设是否存在某种药物，可以模拟后适应直接对冠脉的开通和再闭，作为接受溶栓，介入等血管再通治疗的补救治疗，那将大幅度提高缺血再灌注损伤的临床治疗价值。本文就此设想，将进一步研究IPOC在心肌缺血再灌注损伤中的作用，研究心肌缺血再灌

7、注损伤(I/R)，心肌缺血预适应(IPC)，心肌缺血后适应(IPOC)中TLR4的表达。探讨IPOC与TLR4在心肌缺血再灌注损伤发挥其保护作用过程中的相关性，设想两种方法是否存在保护缺血心肌中存在相同或相近的机制，提出是否可能将IPOC与优化TLR4相结合，通过药物后适应治疗心肌缺血再灌注损伤。为实验室寻找缺血再灌注损伤治疗方法上提供新的研究方向。1材料和方法1.1实验动物Vistar大鼠50只，雌雄不拘，体重180g-250g。购自内蒙古大学动物实验基地。1.2主要试剂氯化硝基四氮唑兰（NitroBlueTetrazoli

8、umChloride,NBT）美国Amresco公司生产TLR-4抗体免疫组化试剂盒上海生工公司生产EDTA抗原修复液北京索莱宝科技有限公司生产PBS缓冲液上海基免实业有限公司生产DAB显色试剂盒上海铺镇生物科技有限公司生产苏木素染色液北京赛驰生物科技有限公司生产。1.3主要