高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎

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1、高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎【摘要】　　目的建立HPLC法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎嗪的含量。方法色谱柱为phenomenexLunaC18(2)100A(4.6mm×250mm,5μm)柱，phenomenex保护柱;流动相为甲醇-水(3∶2)；流速1.0ml/min；检测波长295nm；柱温为室温。结果磷酸川芎嗪与辅料及溶剂峰分离良好，在0.408~40.8μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999)。结论该方法简便易行，准确可靠，可用于磷酸川芎嗪纳米脂质体的含量测定。【关键词】磷酸川芎嗪纳米脂质体

2、高效液相色谱　　Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofthecontentoftetramethylpyrazinephosphate(TMPP)inTMPPnanoliposome.MethodsTheconditionofHPLCenexLunaC18(2)100Acolumn(4.6mm×250mm,5μm),mobilephase:methanol/.Theflol/minandthecolumntemperaturetemperature.Res

3、ultsThereatographiccondition．Thecalibrationcurvel(r=0.9999).ConclusionThemethodissimpleandaccurate.Itcanbeusedforthedeterminationofcontentoftetramethylpyrazinephosphatenanoliposome．　　Keyethylpyrazinephosphate(TMPP);Nanoliposome;HPLC　　川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)是中药川芎中的主要活性生

4、物碱，临床上广泛用于缺血性脑血管病的治疗。已上市的川芎嗪制剂主要有磷酸川芎嗪(Tetramethylpyrazinephosphate，TMPP)片剂、胶囊剂和注射剂［1］。口服制剂生物利用度不高；注射剂给药不方便。有研究报道，川芎嗪鼻腔吸收良好［2］。拟将川芎嗪研制成纳米脂质体进行鼻腔给药，以期为川芎嗪的临床应用提供一个方便有效的新给药系统。为控制其质量，本研究采用HPLC法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎嗪含量。　　1仪器与试药　　1.1仪器SummitP680型高效液相色谱仪，包括p682泵、UVD170U可变波长紫外检测器、Chro

5、meceon色谱工作站，德国dionex公司；AUY220型电子天平，Shimadzu公司；phenomenexLunaC18(2)100A(4.6mm×250mm,5μm)柱，phenomenex保护柱，广州菲罗门科学仪器有限公司。　　1.2药品与试剂磷酸川芎嗪，批号：050814，广东丽珠集团利民制药厂；大豆磷脂EPIKURON200，批号：1-5-9022（德国Degussa公司），北京百威昂医药技术开发有限公司提供；胆固醇，上海伯奥生物科技有限公司；聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100），上海凌峰化学试剂有限公司；甲醇为色谱

6、纯，其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1磷酸川芎嗪纳米脂质体的制备采用pH梯度法制备。取磷脂、胆固醇等溶于有机溶剂中，减压蒸发除去有机溶剂，加入柠檬酸溶液水化，间歇式超声，滤过，得空白脂质体。加入适量TMPP，用碱性溶液将外相pH值调至近中性，定容，置水浴中温育，即得。　　2.2TMPP纳米脂质体破膜溶剂的选择为保证脂质体含量测定的准确性，必需选用合适的溶剂系统使脂质体溶解，让药物从脂质体中完全释放出来。分别用甲醇、乙醇、异丙醇、TritonX-100醇溶液等溶剂单独或不同比例混合溶剂溶解脂质体溶液，结果5%TritonX-100醇

7、溶液可溶解脂质体为澄清溶液，且得到的色谱峰峰形较好。因此，选其为破膜溶剂。　　2.3色谱条件色谱柱为phenomenexLunaC18(2)100A(4.6mm×250mm,5μm)柱，phenomenex保护柱；流动相为甲醇-水(3∶2)；流速1.0ml/min；检测波长295nm；柱温为室温。　　2.4方法专属性考察分别取TMPP溶液、空白脂质体用破膜溶剂溶解加水稀释所得的溶液、TMPP纳米脂质体用破膜溶剂溶解加水稀释所得的溶液进样20μl，记录色谱图，结果辅料和溶剂对TMPP测定无干扰，TMPP保留时间约为5.2min。　　2.5线

8、性关系考察精密称取TMPP适量，加水溶解制成含量为40.8μg/ml贮备溶液。精密量取上述溶液加水稀释成20.4，8.16，4.08，2.04，1.02，0.408