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1、血液疗法论文写作：研究冰冻保存后红细胞沉降去甘油的方法-->现代战争中约有25%的伤员需要紧急输血救治,输血是降低伤员伤死率的首要措施。在野战条件下,恶劣的战场环境给战时的血液储备与供应造成极大困难,迫切要求战时血液储存供应的技术能够有效地适应复杂多变的战场环境,做到简便、快速、便携、高效。冰冻保存红细胞简化洗涤的研究,既保证足够的血液供应,又可以缩短血液的处理时间,对战时和突发事件情况下输血治疗起到积极作用。1 材料与方法1•1 仪器与试剂 RC3C离心机(美国SORVALL公司)
2、,CD1200血细胞计数仪(美国ABBOTT),l3300型晶体渗透压仪(美国ADVANCEDINSTRUMENTS),红细胞变形仪(上海世帝公司),723型分光光度计(上海医疗仪器厂),ATP试剂盒购置于Sigma公司。复方甘油购自北京血液中心,按文献[1]方法配制。1.2方法 实验分为保存前组、离心组和沉降组。6份200ml全血采自307医院志愿献血者,ACD-A抗凝。冷冻红细胞的制备及保存方法按文献[1]进行。甘油化红细胞在-80℃条件下保存7d,42℃水浴下解冻。分离心组和沉淀组进行洗涤
3、去甘油。离心组:①加入9%NaCl80ml和6%羟乙基淀粉100ml,1500g离心10min,弃上清;②加入6%羟乙基淀粉100ml,0.9%NaCl150ml,1500g离心10min,弃上清;③加入0.9%NaCl50ml,1500g离心10min,弃上清,重复步骤③。④0.9%NaCl补足原体积。沉降组洗涤包括①加入9%NaCl80ml、6%羟乙基淀粉120ml和5%羧甲基淀粉钠(CMS)70ml,沉降30min,弃上清;②加入6%羟乙基淀粉100ml、0.9%NaC120ml和5%CM
4、S80ml,沉降20min,去除上清;③加入0.9%NaCl20ml,5%CMS40ml,沉降15min,重复步骤③。④0.9%NaCl补足原体积。1.3 检测 透射电镜观察红细胞形态;细胞计数仪检测红细胞数及血红蛋白含量;苯息丁法检测游离血红蛋白的含量;晶体渗透压法检测甘油残留量,当悬浮红细胞上清液中的晶体渗透压低于420mOsm,认为上清液中甘油的含量不超标[2];用变形仪检测红细胞的变形指数;ATP含量的测定:参照试剂盒的说明书进行;体外溶血实验:参照国家血液质量管理手册方法[3]。2 结
5、果2•1 保存前、冰冻保存离心后、冰冻保存沉降后红细胞的形态与保存前红细胞相比较无显著差别,无畸形细胞,见附图。2.2 两种去甘油方法,细胞的回收率及上清液中甘油残留量比较结果见表1,采用SAS软件,erymanHT.Cryoprotectiveagents.Cryobiology,1971,8:1732FrancesKanualoftheAmericanAssociationofBloodBanks.美国血库协会技术手册委员会编.肖星甫等译,1981,341~3453中华人民共和国
6、卫生部•中国输血技术操作规程•血站部分•天津:科学技术出版社,1997,42~434罗庆良,梁德明,于振羧•甲基淀粉钠分离循环血白细胞血小板的研究•军事医学科学院院刊,1987,2:1505 刘 安,韩 颖,靳 鹏,等•一种简便准确的保存红细胞甘油残留量的检测方法•临床医学与预防医学•成都:四川科学技术出版社,2000,10,185摘要:目的 研究冰冻保存后红细胞沉降去甘油的方法。方法 6份全血采自健
7、康献血者,ACD抗凝,4℃保存1d,离心获压积红细胞,加入甘油到终浓度为40%,-80℃保存7d。42℃条件下冻融红细胞;分两组进行洗涤去甘油,离心组:常规法洗涤红细胞4遍。沉降组加入9%NaCl、6%羟乙基淀粉和5%羧甲基淀粉钠,沉降30min,弃上清;加入6%羟乙基淀粉、0.9%NaC1和6%CMS,沉降20min,去除上清;加入0.9%NaC1和5%羧甲基淀粉钠,沉降15min,去除上清;重复步骤;以生理盐水重悬红细胞。结果 洗涤后红细胞形态正常,离心洗涤和沉降洗涤医学论文枪手后红细胞的回
8、收率(%)分别为87.95±8.60和89.25±4.17、上清液中游离血红蛋白的含量(g/L)为0.15±0.09和0.23±0.19,上清液中晶体渗透压(mOsm)为290.83±4.17和295.67±8.07、ATP含量(μm/gHb)34.02±9.07和34.70±11.01,红细胞的变形指数分别为0.59±0.09和0.61±0.06,统计学处理上述各项指标,两组实验比较,差异无显著性。结论 冰冻保存后的红细胞,以沉降法去甘油与常规离心法效果无显著差-->别,细胞质量符合血库的质量
