反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参

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1、反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参【摘要】　　目的建立反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参皂苷Rb3的含量。方法色谱柱为HypersilC18(5μm，4.6mm×200mm)，流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱：0～14min，19→33；14～16min，33→49，流速为1.0ml/min，检测波长为203nm，柱温为30℃。结果人参皂苷Rb3进样量在1.7696～10.6176μg（r=0.9999）的范围内线性关系良好，平均回收率为98.22%，RSD=1.26%。结论该方法简便、准确、重现性好，可用于

2、七叶神安胶囊的质量控制。【关键词】反相高效液相色谱梯度洗脱法七叶神安胶囊人参皂苷Rb3　　Abstract：ObjectiveToestablishthemethodfordeterminationofthecontentsofGinsenosideRb3inQiyeShen'ancapsule.MethodsThechromatographicconditionsincludedHypersilC18column（4.6mm×200mm,5μm）andthemobilephaseconsistedofacetonitril-0.2%phos

3、phoricacid:0～14min,19→33；14～16min,33→49.Detection.Theflol/min.Columntemperatureethodissimple,accurate,reproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofQiyeShen'ancapsule.　　Key，4.6mm×200mm)；以乙腈为流动相A，以0.2%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长203nm；柱温30℃；进样量10μl。表1流动相梯度洗脱程序（略）

4、　　2.2供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，精密称取适量（约相当于含三七叶总皂苷100mg），置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250in，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。　　2.3标准曲线的绘制精密称取人参皂苷Rb3对照品45mg，置25ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取1，2，3，4，5，6ml置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注人液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积

5、A对进样量C（μg）进行线性回归,得回归方程为：A=25092+199818C，r=0.9999，表明人参皂苷Rb3进样量在1.7696～10.6176μg范围内与峰面积有良好的线性关系。　　2.4精密度实验精密吸取人参皂苷Rb3对照品溶液10μl，重复进样6次，测定峰面积，结果RSD为0.31%。　　2.5稳定性实验取供试品溶液，分别于制备后0，2，4，6，8，12h测定，结果RSD为0.32%，表明样品溶液在12h内稳定。　　2.6重复性实验取同一批号样品6份，精密称定，依法平行测定，结果人参皂苷Rb3平均含量为13.990mg/粒，RS

6、D为0.88%。　　2.7加样回收率实验取已知含量的样品6份，精密称定，分别精密加入人参皂苷Rb3对照品适量，依法测定，计算回收率，结果见表2。表2加样回收率实验结果（略）　　2.8阴性干扰实验取阴性对照样品按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果在选定的色谱条件下，供试品中人参皂苷Rb3峰与其他组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照对测定无干扰。见图1～3。　　2.9样品测定取样品3批，依法测定含量。结果见表3。表3样品测定结果（略）　　3讨论　　样品前处理分别

7、对不同提取溶剂及不同超声处理时间进行了比较，结果表明以乙醇为溶剂，超声处理15min即可基本提取完全。　　本品虽为单方制剂，但所含成分较复杂，对分离有一定影响，本实验曾对甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.5%冰醋酸溶液，乙腈-0.2%磷酸溶液4种流动相系统分别进行筛选优化，最后确定以乙腈-0.2%磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱，能使人参皂苷Rb3达到基线分离，且其他成分对测定无干扰。　　本实验方法亦可用于三七叶药材及其复方制剂的含量测定。【