内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制

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1、内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制【摘要】目的探讨利用低分子肝素对内皮抑素进行结构修饰，并评价其对角膜新生血管(cornealneovascularization，V)的抑制作用。方法采用化学方法用低分子肝素修饰内皮抑素，碱烧伤法建立兔角膜新生血管模型，分别在球结膜下注射低分子肝素化内皮抑素（Ⅰ组）、内皮抑素（Ⅱ组）和生理盐水（对照组），观察新生血管的生长情况。结果成功的利用低分子肝素对内皮抑素进行了结构修饰，动物实验表明Ⅰ组新生血管的长度、面积、数量、VEGF的表达均明显低于其它两组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论低分子肝素化内皮

2、抑素可有效抑制角膜新生血管的生长，效果优于内皮抑素。【关键词】低分子肝素内皮抑素修饰角膜新生血管兔itsangiogenesiseffectsonrabbitcorneasAbstract:ObjectiveToinvestigatethemodificationofendostatin(ES)olecularodifiedicalmethod.TherabbitVmodeladealsaline(controlgroup)alleringroup1thanintheothertolecularg，中国烟台东诚生化有限公司）；健康成年新西兰白兔30只（山东大学

3、动物实验中心），体重2.02.5?kg，雌雄兼有，眼部无异常。1.2方法1.2.1LMm)分别为1.32±0.18、1.77±0.27、2.32±0.58,平均面积(mm2)为4.33±1.21、5.84±1.27、7.52±1.35,治疗组与对照组相比以及两治疗组间相比差异有统计学意义（P<0.05）。碱烧伤后第13天的新生血管生长情况见彩图79。VEGF免疫组化结果为：对照组在角膜全基质层内有炎性细胞浸润，在炎性细胞胞浆可见VEGF表达呈；Ⅰ组在角膜前1/3基质层内有炎性细胞浸润，在炎性细胞胞浆可见VEGF表达呈＋；Ⅱ组在角膜前1/2基质层内有炎

4、性细胞浸润，在炎性细胞胞浆可见VEGF表达呈。图像分析显示Ⅰ组、Ⅱ组与对照组VEGF含量（灰度值）依次为102.35±18.56、125.46±21.43、152.05±25.24，治疗组与对照组相比及两治疗组间相比VEGF表达均明显减少（P<0.05）。新生血管形态和数量观察的结果：对照组在角膜全基质层内可见大量成熟的新生血管，管壁薄、管腔大、排列紊乱；Ⅰ组浅基质层内可见少量新生毛细血管，管腔较小，分布稀；Ⅱ组新生血管介于两者之间。Ⅰ组、Ⅱ组、对照组的新生血管数量（个/400倍视野）分别为1.05±0.84、3.56±1.85、6.22±2.79，

5、治疗组与对照组相比及两治疗组间相比差异有统计学意义（P<0.05）。3讨论ES是1997年于小鼠血管内皮细胞瘤的培养上清中发现的，后证实是由体内XVIII型胶原在组织蛋白酶或金属蛋白酶作用下，其羧基末段被分解出的一段大小为20?kD的片段［1］。ES是目前公认的最强的新生血管抑制剂，可以特异性作用于血管内皮细胞，抑制其增殖和移行，从而抑制新生血管生长。近年来多肽、蛋白质作为药物，已越来越多地应用于临床。但是蛋白质具有抗原性，且有的蛋白质由于在体内半衰期短、生物利用度低而达不到治疗作用。化学修饰能够赋予蛋白质和多肽类药物许多优良性能，如免疫原性降低或消失，

6、毒副作用减少，半衰期延长，物理、化学和生物稳定性增强等。基于内皮抑素的作用机制及肝素的生物学特性，内皮抑素既对内皮细胞有亲和作用又具有肝素的特异性结合位点［5］，故本研究采用LMS,BoehmT,FolkmanJ,etal.Endostatin:anendogenousinhibitorofangiognesisandtumorgrootoneuronexcitation［J］.BrainRes,1979,169:1127.［3］FengJ,CaiX,ZhaoJH,etal.SerotoninreceptorsmodulateCABAAreceptorcha

7、nnelsthroughactivationofanchoredproteinkinaseCinprefrontalcortical［J］.JNeurosci,2001,21（17）:6502.［4］王晓燕，孙汶生，马春红，等.重组人分泌型endostatin的纯化及其抑癌活性探讨［J］.中国肿瘤临床，2003,30（2）：136139.［5］KreugerJ,MatsumotoT,VaneerschM,etal.Roleofheparansulfatedomainorganizationinendostatininhibitionofendothelial

8、cellfunction［J］.EMB