hplc法测定参皇软膏中人参皂苷rg1的含量

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1、HPLC法测定参皇软膏中人参皂苷Rg1的含量参皇软膏收载于《国家中成药标准汇编》二○○二年，（眼科、耳鼻喉科、皮肤科分册p469）,其含量测定是采用薄层扫描法定量，只有使用瑞士卡玛的自动条形点样、展开箱、浸板技术等一系列设备才能有一定的准确度，但目前由于薄层扫描法应用不多，且瑞士卡玛系列设备价格昂贵，企业一般都采用人工圆点点板、展开、手动喷板显色等一系列原始操作，这样导致此方法检验误差大、重现性差，特别是参皇软膏中的人参皂苷Rg1的斑点附近有人参皂苷Re等高含量成分干扰，导致薄层层析一次成功率低，这里采用广泛应用

2、的HPLC法测定人参皂苷Rg1的含量，可提高准确度，降低检验难度及缩短检验周期。1仪器和试药1.1仪器：高效液相色谱仪（美国onsilC18柱（250mm4.6mm,5um）；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(100:400)；流速：1.0ml/min；进样量：10ul；检测波长：203nm。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于1500。2.2标准曲线的制备取人参皂苷Rg1对照品（60C°P2O5真空减压干燥4h）适量,加甲醇溶解并制成12.53ug/ml、25.06ug/ml、37.59ug/ml、

3、50.12ug/ml、75.18ug/ml的对照品溶液，依照上述色谱条件进样测定，峰面积值依次为555.03、1110.06、1665.38、2220.16、3330.12。将峰面积（Y）与浓度（X）作线性回归，得回归方程Y=0.0218X（r=0.9999）。结果表明，人参皂苷Rg1进样量在0.1253ug～0.7518ug范围内与峰面积线性关系良好。2.3测定方法：对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1对照品（60C°P2O5真空减压干燥4h）适量，加甲醇制成40ug/ml的溶液，即得。供试品溶液的

4、制备：精密称取本品75g置具塞锥型瓶中精密加入甲醇150ml，搅匀，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，离心（4000转/分钟，10分钟），取出滤过，精密量取续滤液100ml，蒸干，残渣用乙醚洗涤4次，每次10ml，弃去乙醚液，残渣挥干乙醚，用水饱和的正丁醇25ml使溶解，置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用乙醚洗涤2次，每次20ml，弃去乙醚液，残渣挥干乙醚，用甲醇溶解至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得。用微孔滤膜（0.45um）

5、滤过，续滤液作为供试品溶液。2.6稳定性试验取同一供试品溶液分别间隔一定时间进样一次，共考察72小时，结果稳定，RSD为0.63%（n＝6）。2.7干扰试验自制参皇软膏阴性样品，制成人参皂苷Rg1阴性对照液,与供试品溶液和参皇软膏对照品溶液分别注入液相色谱仪,供试品与对照品相应位置上有相应的吸收峰,而阴性对照在相应位置上无吸收峰,说明其他成分不干扰人参皂苷Rg1含量,方法具有专属性。2.8与薄层扫描法结果对比试验：表3批号061220106122020612203薄层扫描法0.1439mg/g0.1398mg/g

6、0.1366mg/g高效液相色谱法0.1080mg/g0.1067mg/g0.1058mg/g3讨论3.1检测波长的选择：吸取人参皂苷Rg1对照品溶液作光谱扫描，在203nm波长处有最大吸收，与2005年版《中国药典》⑴一部收载的人参药材质量标准项下含量测定的检测波长一致，故本品的测定波长选定为203nm。3.2吸取吸取人参皂苷Rg1对照品溶液与吸取人参皂苷Rg1对照品溶液吸取人参皂苷Re对照品溶液,同时注入液相色谱仪中，计算分离度为2.8，符合要求。3.3参皇软膏的含量测定方法，过程中由于有油脂包裹干扰，导致有

7、效成分在检验中回收率低，薄层层析法扫描时干扰因素多可使检验结果偏低，如果采用HPLC能提高回收率，是目前急待启用的方法。