乙型肝炎病毒感染模型研究进展

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1、乙型肝炎病毒感染模型研宄进/PC陈秀丽唐亚芳李昱晓杜婧石家庄市第五医院肝病研究所河北石家庄050021基金资助项目:河北省卫生厅科学基金资助项目,No.20120174【摘要】乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)感染可引起严重的慢性肝脏疾病.HBV異有高度的种属特异性和组织特异性，易感宿主范围狭窄，仅限于人、黑猩猩等灵长类动物,HBV的研究很大程度上依赖于动物模型和组织培养，很难在普通实验动物中建立疾病模型.木文就HBV感染的细胞模型和动物模型作一综述.【关键词】乙型肝炎病毒；感染；动物模型；细胞模型【中图分类号】R37【文献标识码】B【文章编号】1008—6315(2

2、015)10—0603—010引言人体感染HBV以后产生免疫耐受，是HBV感染后形成慢性化的主要机制之一.由于缺乏有效的体外病毒感染和复制模型系统,HBV感染肝脏的早期机制研究进展较为缓慢,从而在一定程度上影响了乙型肝炎及其相关肝脏疾病的基础和临床研宄.目前已有的HBV感染模型有两种，即细胞模型和动物模型［1一2］，木文做一综述.1动物模型目前,HBV感染动物模型分为6种，分别是灵长类动物模型、树駒模型、土拨鼠(旱獭)嗜肝病毒模型、鸭嗜肝病毒模型、HBV转基因小鼠模型、人一鼠嵌合模型等.但灵长类动物受到保护;鸭的药代动力学和免疫学遗传背景与人类有很大的不同;土拨鼠仅产于北美，运输困难且价

3、格昂贵;从而这些动物模型的应用受到限制.1.1黑猩猩感染HBV可以山现典型的急性乙型肝炎症状,其细胞免疫反应与人类相似，可用于急性乙肝免疫学研究［3］.但是黑猩猩属于濒危动物，应用受到限制.猩猩易于感染HBV/R是不能表现疾病的所有症状，不利于作为动物模型使用.1.2目前应用较多的是鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染模型,Zhao和Liu等研宄团队采用DHBV感染鸭原代肝细胞建立模型，应用2—DE和蛋白质组学技术，深入探讨了HBV和肝细胞之间的相互作用以及HBV致病的分子生物学机制.1.3土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)与人HBVDNA序列同源性约为7

4、0%，而且基因组结构相似，因此，土拨鼠(旱獭)嗜肝病毒感染模型得到广泛应用,Roggendorf等采用WHV动物模型，进行了乙型肝炎的DNA疫苗和新药的开发研究.东方早獭(Marmotamonax)模型多疲用于HBV感炎相关的HCC的研宄[4].1.4HBV转基因小Kl(transgenicmice/Tg鼠)模型HBV全基因Tg鼠或超长序列Tg鼠具有HBVDNA复制及蛋白质合成的能力，能产生较高水平的血清HBsAg及HBeAg,血清中可检出HBVDNA,可用于评价抗病毒药物的疗效Jin和Fox等应用Tg鼠模型研究了NK细胞与肝纤维化的关系，发现NK细胞可以引起肝脏星状细胞的活化，从而导致

5、细胞外基质的增加，加重肝纤维化,另有报道应用Tg鼠模型研究了乙型肝炎的发病机制和疾病演变规[5].1.5近年来，人一鼠嵌合模型的研究成为热点，将人肝细胞移植到小鼠体内，作为研宄HBV感染的良好体内模型[6].0前主要有三种模型，第一种是三合体小鼠(trimeramouse)模型:正常小鼠给予SCID种小鼠骨髓细胞，进行福射保护处理并经致死剂量辐射照射后，可以移植HBV感染的人肝组织，用于研究HBV的复制和治疗,Eren和Dagan等采用这种小鼠模型研究幵发抗HBV的新型药物;第二种是移植人肝细胞的免疫缺陷鼠模型;第三种是uPA转基因小鼠模型:uPA即尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物,Meule

6、man和Lutgehetmann等建立了UPA+/H—SCID转基因小鼠模型.2细胞模型0前,用于体外研宄HBV的细胞模型分为两类:分别是人原代肝细胞和肝癌细胞来源的细胞系.人原代肝细胞保留了分化肝细胞的重要细胞学特性，允许HBV的自然穿入和完整复制.然而在体外培养几天后，原代肝细胞开始出现肝细胞特殊形态的消失，并且失去了对HBV的感染和复制能力.人原代肝细胞培养因为存在上述困难而限制了其应用，对HBV的研究更多的依赖于转染了HBVDNA克隆的分化良好的肝癌细胞系.第一类包括人(或者树駒)原代肝细胞和永生化人肝细胞(如HepRG)2种.第二类是通过将HBV基因组转染到人肝细胞系中，建立相

7、应的HBV瞬时或稳定复制细胞模型，这种细胞模型可以用来研究病毒突变表型耐药和新型抗HBV药物的研发.2.1HepG2细胞系，是由肝胚瘤细胞的活体组织建株，可分泌多种血浆蛋白和表达HBsAg和HBeAg.其中最常用的是HepG2.2.15细胞系,HepG2.2.15细胞稳定转染了完整的HBV基因组，表达HBVRNA、病毒蛋白并能产生病毒样颗粒.由HepG2.2.15细胞分泌的病毒颗粒己经被证实可以感染黑猩猩.由于HBV基因组是通过转染