补骨脂汤对痴呆大鼠海马nr2b、bdnf-trkb表达的影响

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1、补骨脂汤对痴呆大鼠海马NR2B、BDNF/TrkB表达的影响作者：郑里翔，崔志远，郭慧君，余世平【摘要】目的为探讨补骨脂汤对改善血管性痴呆大鼠的空间学习记忆的机理。方法用双侧结扎颈动脉反复灌注，用Morris试验测试大鼠的空间学习记忆，RT-PCR测定与学习记忆密切相关的NR2B、BDNF/TrkB基因表达产物。结果补骨脂汤高、低剂量组的逃避潜伏期都明显短于模型组（P<0.01），补骨脂汤高、低剂量，均可明显提高NR2B、BDNF/TrkBmRNA表达（P<0.05）。结论补骨脂汤能明显改善血管性痴呆大鼠的空间记忆，其可能的机制是通过提高NR2B、BDNF

2、/TrkBmRNA表达水平而发挥作用的。【关键词】补骨脂汤；血管性痴呆；NR2B；BDNF/TrkBmRNAAbstract：ObjectiveToelucidatethemechanismofBuGuZhiDecoctionhoprovevasculardementiaratsonspatiallearningandmemory.MethodsExperimentalVDmodelratsoncarotidarteriesligationandreperfusion,theperformanceofspatiallearningandmemoryofallratse

3、asuredusingtheMorrisaze.DAR2、BDNF/TrkB基因表达产物入手，进一步阐明作用途径，为其临床应用提供实验依据。　　1材料与仪器　　1.1动物实验动物选用SD大鼠60只(购于南昌大学医学院动物中心)，雌雄各半，体质量160～180g。　　1.2中药由江西中医学院附属医院药房提供。　　1.3仪器及试剂水迷宫实验装置，PCR扩增仪,核酸电泳槽，DPG-900型凝胶图像分析系统，净化台，DYY-5型电泳仪。Trizol及Taq酶均自美国Invitrogen公司，其他化学试剂都是国产试剂。　　2方法　　2.1分组把60只大白鼠随机分成5组，每组雌雄

4、各半，分别为假手术组，模型组，中成药组，补骨脂汤低剂量组，补骨脂汤高剂量组。　　2.2造模在造模前补骨脂汤高、低剂量组用补骨脂汤灌胃7d，第8天对5组进行手术造模，用2﹪的戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，75﹪酒精消毒颈前皮肤，颈正中切口分离双侧颈总动脉穿线备用，用无创动脉夹夹闭一侧颈总动脉10min,去夹后立即关闭另一侧颈总动脉，每侧夹闭1次，每次10min，去动脉夹撤线缝合皮肤，在手术部位撒一层青霉素粉末。假手术组只进行颈总动脉的分离不夹闭血管，各组手术造模后待大鼠苏醒然后放回笼中保温饲养。　　2.3给药方法　　术后第3天开始给药，中成药组剂量予银杏叶片7.

5、2mg/(kg·d),补骨脂汤低剂量组剂量予9.82mg/(kg·d)，高剂量组剂量予19.64mg/(kg·d)，2次/d，连续25d。　　2.4Morris实验　　将大鼠面向池壁置于象限1/2弧度处入水，经120s未找到站台的大鼠，将其引至站台停留10s,引导其学习记忆，各组大鼠每天训练2次，共训练6d，记录大鼠找到平台的确切时间。在整个实验中，实验者要与动物视线隔开，室内要保持安静及周围环境的相对稳定。　　2.5半定量的RT-PCR　　按照TRIZOL试剂说明书提取总RNA，在20μl反转录反应体积中进行反转录，合成cDNA。取上述逆转录产物PCR扩增NR2B、

6、BDNF、TrkB。NR2B：Forer:5’GCTCAGCGACCTGTATGG3’，Reverseprimer:5’AGGCGAGTTCTCCTTTGTT3’，产物长度331bp；BDNF：Forer:5’TTATTTCATACTTCGGTTGC3’，Reverseprimer:5’ATGGGATTACACATTGGTCTC3’,产物长度547bp；TrkB：Fore:5’GGCTTATGCTTGCTGGTC3’,Reverseprimer:5’CTGGGTCAATGCTGTTAGGT3’,产物长度148bp。25μlPCR反应体系中进行PCR反应（NR2BmRN

7、A、BDNFmRNA、TrkBmRNA:95℃5min,94℃30s,53℃20s,72℃30s,30个循环，72℃终延伸5min；GAP-43mRNA：95℃5min,94℃30s,55℃20s,72℃30s,30个循环，72℃终延伸5min）。PCR产物用2﹪琼脂糖凝胶溴化乙锭电泳分离，用凝胶图形分析系统进行拍照，观察结果并测定灰度值，以扩增的目的条带和同时扩增的β–actin的灰度值比对各基因转录水平进行衡量。　　2.6统计学处理数据采用±s表示，应用应用SPSS15．0统计软件，组间比较采用方差分析及q检验。　　3结果　　3.1补骨脂汤对血管