仪器分析实验预习和实验报告补充

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1、实验2、高效液相色谱法测定可乐中的咖啡因含量一、实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作；2、掌握标准曲线法（外标法）定量分析的方法；3、掌握UV检测器的工作原理及应用范围。二、实验原理根据朗伯一比尔定律（A=abc）:在一定浓度范围内，样品中被测组分的含景与响应值（峰而积或峰高）成正比。用标准物质配制一系列不同浓度的标准样品，在一定的色谱条件卜*，分别测定标准样品和试样的峰而积，以标准溶液的浓度为横坐标、峰而积为纵坐标，采川最小二乘法回归得到被测样品杯准ilh线的方程；将测得试样的峰面积代入方程，计算得到试样屮咖啡W的含景。三、仪器、试剂及色谱条件仪器：Agilent1200HPLC

2、；C18高效液相色谱柱，0）4.6mmxl5cm,填料粒度5pm;紫外光检测器（DAD）;微量进样器（25pL）；色谱条件：流动相：甲醇：水=65:35（V/V）,ImL/min；检测波长：254nm；色谱柱温度：30°C；进样虽：10pL。试剂：无水甲醇、咖啡因（均为分析纯试剂）、市饵可乐、超纯水。四、实验步骤1、流动相的配制：甲醇、水分别须经0.45微米有机膜、水相膜过滤后使用；2、流动相脱气：将流动相置于超声波清洗器上脱气15min（本机配A动脱气装置，脱气过程略）；3、标准溶液的配制:配制咖啡因含量为20、40、80、160、32（^g/mL的甲醇溶液;4、按仪器操作说明打开计

3、算机和主机，进入色谱工作站，设定色谱条件；5、启动仍谱系统，调整仪器基线，待基线稳定即可进样；7、用进样器分別抽取lO.OpL系列标准液及样品，排岀注射器中气泡，插入六通阀的进样孔进样，仪器自动开始采集、保存数据；8、实验结朿后，用纯甲醇清洗色谱柱及进样器，关闭仪器。五、数据处理及实验结果以标准溶液的浓度为横叱标、峰而积为纵叱标，采用最小二乘法回归得到标准曲线方程，计算可乐中咖啡因的含量,实验结果见下表。HPLC测定可乐中咖啡因含量实验结果表序号样品名称含量/pg/mL峰面积保留时间/min备注1标准溶液20.0标准曲线方程：2标准溶液40.03标准溶液80.0R=4标准溶液160.0

4、5标准濟液320.06可口可乐7百事可乐六、思考题1、标准曲线法定量准确度的影响因素有哪些?2、为什么流动相必须要经过脱气、过滤处理?3、紫外检测器适合于分析那些种类的物质？实验10、GC-MS定性分析混合溶剂的成分一、实验目的1、学习GC-MS的基本操作；2、掌掘GC-MS的构成及丄作原理；3、丫解谱库检索法定性分析冇机化合物的方法。二、实验原理混合物样品在色谱柱屮被分离为单一组分，依次进入质谱仪的离子源弁被电离成具有不同质核比（m/z）的离子，质M分析器将其有不同m/z的离子分离，被分离的离子按照nVz由小到大的顺序依次到达接收器产生电信号并被记录，得到各组分相应的质谱阁（棒阁），

5、根据质谱图可采川谱库检索法或谱图解析法分别对各组分进行定性分析。三、仪器、试剂及仪器条件仪器:GC-MS2010PLUS（曰本岛津）;试剂:酯类混合物;仪器条件:1、色谱仪条件:RTX毛细管柱,

6、计算机、色谱仪及质谱仪，建立通讯联系；2、启动真空系统，卒真令度达到仪器规定值后进行仪器调整；3、按照分析条件设定色谱仪、质谱仪工作参数；4、仪器完成准备后，进样并按下程序启动开关；5、观察测试过程，当总离子色谱阁（TIC）组分峰全部流出后，停止扫描；6、对TIC阁中的各组分进行谱库检索并记录实验结果；7、按照程序关闭真空系统及GC-MS;8、关闭氦气钢瓶。五、数据处理及实验结果实验结果见下表GC-MS定性分析混合溶剂成分实验结果表序号保留时间(min)相对分子质量化合物名称结构式相似度123456六、思考题1、简述001^屮0€：、MS的主要作川，说明GC与MS联川的优点。2、为什么

7、GC-MS要在高真空度下操作？3、GC-MS适合于分析那些利

8、类的样品？